正交实验法优选重楼皂苷提取工艺的研究

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1、正交实验法优选重楼皂苷提取工艺的研究【摘要】目的优选重楼皂苷的最佳提取工艺条件。方法以薯蓣皂苷元的含量为考察指标，用高效液相色谱（HPLC）法测定其含量，采用正交实验法对重楼皂苷的提取工艺进行优选。结果最佳提取工艺为重楼药材粗粉加8倍量85%的乙醇回流2次，1.5h/次。结论优化得到的工艺简便易行，稳定性好。【关键词】重楼；薯蓣皂苷元；提取工艺；正交实验　　OptimizationofExtractionProcessofSaponinsofParisPolyphyllaizetheextractionprocesssaponinsofPa

2、rispolyphylla.MethodsTheorthogonaldesignmethodizeextractionprocessforsaponinsofParispolyphyllaountofDiosgeninasobservingindex.ResultsTheoptimumextractingprocedurees,eandrefluxingniyminuteseachtime.ConclusionTheoptimumextractingprocessissimple,stableandefficient.　　Keyethod重

3、楼为百合科植物云南重楼PairspolyphyllaSmithvar.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七叶一枝花ParispolyphyllaSmithvar.chinensis(Franch.)Hara的干燥根茎［1］。重楼中的化学成分主要以甾体皂苷类为主，是其主要活性成分。其苷元主要为异螺甾烷醇类的薯蓣皂苷元和偏诺皂苷元［2，3］。现代药理研究表明该药具有抗肿瘤、抗菌消炎、止血、镇静镇痛、抑制精子活性、免疫调节等广泛的药理活性［4］。为了更好地开发利用重楼药材，为含重楼中成药制剂开发提供实验依据，本实验以

4、薯蓣皂苷元转移率为指标，采用正交实验法对重楼皂苷的提取工艺进行优化选择获得最佳提取工艺条件。　　1材料与方法　　1.1仪器及材料　　Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)，VilliporeSimplicity-185超纯水器(美国密里博公司)；薯蓣皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所）；重楼药材（购于广西中医学院一附院仁爱分院药房）；HPLC用水为超纯水，甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。　　1.2色谱条件色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C8(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：乙腈：

5、水（80:20）；柱温：30℃；流速：1.0ml·min-1；检测波长：203nm；理论塔板数按薯蓣皂苷元峰计不应低于8000。　　1.3对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品5.04mg，用甲醇定容至10ml，摇匀，即得。　　1.4供试品溶液的制备及测定重楼药材经干燥并粉碎后，准确称取3g，按正交设计进行回流提取，趁热滤过，合并二次提取液，回收乙醇至干。加2mol/L的盐酸30ml，置于沸水浴中水解2h，冷却后用石油醚(60～90℃)萃取5次，20ml/次，合并萃取液，水洗至中性，回收石油醚至干，残渣用甲醇溶解定容于25ml容量瓶中，作

6、为供试品溶液。在上述色谱条件下，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，进样测定，计算供试品液中薯蓣皂苷元含量。　　1.5线性关系考察精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液5,10,15,20,25μl，进样，测定，以薯蓣皂苷元的量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为Y=616.3135X+52.9100，r=0.9999，表明薯蓣皂苷元含量在2.52～12.6μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。　　1.6正交实验方案设计根据重楼活性成分的性质及初步预试验结果，采用L9(34)正交表安排重楼用乙醇提取工艺，以薯蓣皂苷元的转移

7、率为评价指标，选择乙醇浓度、溶剂用量、提取时间3个因素，每个因素设3个水平，因素水平见表1，实验设计结果见表2，方差分析见表3。表1重楼皂苷提取工艺因素水平（略）表2乙醇提取工艺正交实验设计及结果（略）表3方差分析（略）　　2结果　　2.1直观分析由直观分析（表2）得各个因素的主次顺序为C>A>B，即回流时间>乙醇浓度>乙醇用量，最佳方案为C3A2B3。　　2.2方差分析由方差分析（表3）得各个因素的主次顺序为C>A>B，乙醇浓度和回流时间对结果有显著性影响，乙醇用量对结果的影响无显著性，但是用8倍量提取

8、对提取效果还是有明显的增强，结合实际生产，将乙醇倍数选为8倍，即提取工艺为A2B3C3，即加85%乙醇8倍量，回流提取两次，1.5h/次。　　2.3验证性实验准确称量重楼药粉3份