结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展.doc

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1、结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展【关键词】结核病结核病（tubeiculosis,TB）是一种由结核分枝杆菌（mycobacteriumtuberculosis,MTB）引起的人兽共患的慢性传染病，可累及全身多种组织器官，其中以肺结核（pulmonarytuberculosis）最为常见。由于MTB耐药株的出现，AIDS合并MTB感染以及全球范围的结核高危人群的流动，造成了TB的全球流行。化疗是防治TB的主要措施，但由于其疗程较长，费用较高，毒副作用较大，易产生MTB耐药株，这就需要研究更有效的防治措施。卡介苗（BCG）作为预防结核的疫苗，自1921年发现以来一直受到人们的关注。到目前为止，

2、BCG接种人群已达30亿人份。但是经过近一个世纪的研究与应用，发现BCG对结核病的免疫保护力低于80%，对于有免疫缺陷的病人，BCG接种还有可能导致结核的全身播散。因此研制新型有效、安全的结核用疫苗成为国内外学者共同关注的一个重要课题。分泌性蛋白是MTB生长过程中分泌到胞外的一类蛋白，是目前发现的保护性最好的一组抗原蛋白，对TB的防治具有重要意义。此外，一些存在于细菌细胞壁及细胞质中的蛋白质，也能诱导细胞免疫反应，对结核的感染发挥免疫保护作用。其中分泌性蛋白和细胞壁表面的蛋白是主要的免疫保护性抗原，将成为新疫苗研究的首选靶抗原。现将MTB的保护性抗原的理化性状、生物学特征、免疫学功能等介绍如

3、下。1分泌性蛋白1.16KD早期分泌抗原靶（the6KDearlysecretedantigenictarget,ESAT6）家族ESAT6家族包含有接近100种蛋白，研究较多的主要有ESAT6、CFP10和TB10.4，相对分子质量（Mr）6～10KD。(1)ESAT6：ESAT6是一种主要存在于结核杆菌早期培养滤液（STCF）中的低Mr蛋白。由RD1区的Rv3875基因编码，它缺乏传统的信号序列，由ESX1系统这一替代分泌途径分泌。用SDSPAGE电泳法测定，结果显示其Mr为6KD，激光解析光谱法测定其Mr为9890±10Da，与依据氨基酸序列推测的理论分子量9975Da极为接近。Sor

4、ensen，Harboe等[1，2]用Westernblot，Southernblot以及PCR等方法从蛋白及基因水平分析了ESAT6的分布，ESAT6基因仅存在于致病性分枝杆菌中，所有BCG菌株（如Tokyo株、Russia株、Sweden株、Moreau株等）及绝大部分环境分支杆菌基因组均丢失该基因，不表达ESAT6蛋白。ESAT6在MTB增殖期和非增殖期都高水平地转录[3]，因此，无论是在活动性TB还是在感染潜伏期，ESAT6均可有效地诱导细胞免疫反应。ESAT6上有两个CD4+T细胞表位，分别位于N端第1～20位氨基酸和第51～60位氨基酸。实验表明[4～6]，ESAT6CD4+T淋

5、巴细胞抗原决定镞可被不同遗传背景的鼠、豚鼠、人及牛1的T淋巴细胞识别，产生大量IFNγ。ESAT6也可诱发宿主产生特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CD8+CTL），其两个CD8+表位分别位于第21～29和第69～76位氨基酸。Harboe.M[7]等的研究表明，ESAT6与单克隆抗体HYB768反应的表位位于N端第3～15位氨基酸中，与CD4+T细胞的一个表位重叠。一些研究表明，RD1介导的毒力与ESAT6的分泌有关，灭活基因esat6和cfp10，或者分泌系统基因，可导致MTB在巨噬细胞内的生长减少及感染鼠模型表位的减少[8～10]。Lalvani[11，12]研究比较了ESAT6ELI

6、SPOT、PPDELISPOT和TST对TB的诊断情况，结果证实了ESAT6ELISPOT诊断活动性TB比PPDELISPOT和TST的敏感性和特异性均高，且对CPTB、弥散性结核、肺外结核以及伴有HIV阳性的TB均有很好的诊断效果。Lalvani、Ewer、张灵霞等[12～14]的研究表明以ESAT6为抗原检测MTB潜伏感染优于TST。(2)CFP10：SDSPAGE分析结果显示其相对分子质量（Mr）在10，000～11，000之间。由RD1区的基因Rv3874（1hp或esxB）编码，Rv3874位于ESAT6编码基因Rv3875（esxA）的上游，并与其处于同一操纵子中，一起进行协同转

7、录。Renshaw等[15]研究表明,与ESAT6的球形蛋白结构不同，CFP10以天然线性分子形式存在，与ESAT6形成一紧密的1∶1复合物。荧光显微研究表明，ESAT6CFP10复合物中，CFP10的C末端与巨噬细胞和单核细胞的特异性结合有关。CFP10与ESAT6一样，存在于MTB的STCF中，并且与ESAT6具有同样的分布。与ESAT6一样，CFP10与细菌的毒力密切相关，其也能诱发机体特异性Th1免疫