血液标本采集课件_5

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1、任务四外周血细胞涂片染色①能进行血液涂片②能配置染色液③能进行血液涂片染色血液标本采集抗生素治疗前，严格无菌静脉采血5～10ml（婴幼儿1～2ml儿童3～5ml）。无菌注入专用培养瓶（成人、儿童、需氧菌、厌氧菌、L型菌不同培养瓶）中送检。如已用抗生素不能停用时，可于48h内分别于下次用抗生素之前，采取多份血液标本送检。血涂片的制备◈制备合格的血涂片，是血液学检查的最基本的技术和方法，◈血片的质量及染色的好坏，直接影响到细胞形态的观察、和诊断。（一）载玻片的清洁1.新玻片：常带有游离碱质，用1mol/LHCl浸泡24h，清水冲净，干燥备用。2.用过的玻片：肥皂（洗涤剂）水煮沸20min，

2、再用热水将肥皂和血膜洗净，清水反复冲洗，干燥备用。3.急用玻片：置0.95L/L乙醇中浸泡1h，蒸馏水洗净后，擦干或烘干备用。(二)制作血涂片的标本最好用非抗凝的静脉血和毛细血管血，也可用EDTA抗凝血制备。EDTA抗凝血中，因Ca2+被螯和，阻止PLT的聚集，推片时PLT均匀平铺，显微镜下易于观察其形态，但有时会看到EDTA引起的RBC皱缩及WBC丛集现象，应注意。随着全自动血细胞分析仪的普及，多用EDTA抗凝血。有些血细胞检查流水线，还可自动推片、染色。(三)血涂片的制备方法：手工推片法自动推片法厚膜涂片法等取血约50ul,将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定

3、均匀的速度向2的方向滑动。注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚*一张良好的血片要求：厚薄适宜，头、体、尾分明，边缘整齐，细胞分布均匀；血膜与载玻片的两边和两端分别留有一定的空隙（0.3cm和1.5cm），血膜长度占载玻片的2/3左右。玻片的一端应留有贴标签的地方。1.5cm0.3cm临沂市人民医院白细胞显微镜分类制血膜瑞氏染色显微镜分类白细胞分类镜检部位及计数方法血涂片注意事项注意血滴大小、推片角度（25～30°角）速度、用力均匀；注意HCT及血液粘稠度每次使用清洁的推片，以免异常细胞的相互污染。涂片制成后，在空气中挥动，使其迅速干燥，天气寒冷或潮湿时，置37℃温箱干燥。干燥后编

4、号2.厚血膜涂片法末梢血1滴（约20μl）于玻片中央，用推片一角将血由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形血膜，自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使RBC溶解，脱去血红蛋白，将水倒掉，血膜呈灰白色，干后染色镜检。特点：血量多，待检成分集中。适用于：疟原虫、微丝蚴等检查3.自动推片机法标准化自动化智能化血细胞常用的染色方法细胞染色技术细胞涂片，在光学显微镜观察之前需要固定、染色。固定：将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联和凝固，以保持细胞原有的形态结构不发生变化。染色目的：使细胞的主要结构（细胞质、细胞核、细胞器等）染上不同的颜色，便于显微镜下观察。常用的染色方法：有瑞氏、姬姆萨、

5、巴氏、HE染色等。细胞染色法类型1普通染色法：如Wright、Giemsa、Papanicolaou、HE染色法等。2荧光染色法：如吖啶橙荧光染色，使细胞内DNA呈现黄绿色荧光，使RNA显桔红色荧光。用于精子和阴道分泌物的的细胞检查。3细胞活体染色法：活体染料有灿烂甲酚蓝、新亚甲蓝、中性红等，如RET染色。4细胞化学染色法：利用化学反应显示细胞内某些成分的存在和数量。被显示的物质有核酸、蛋白质、脂类、糖类、酶类及其他物质等。近年来，把单克隆抗体技术、酶标记技术等应用于细胞化学染色中，发展成为细胞免疫化学染色法。能特异、灵敏地显示细胞内的一些抗原和半抗原物质，应用越来越广泛。碱性染料：为

6、阳离子染料，能接受质子，染细胞核的染料。如亚甲蓝、天青。酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。3.复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料（一）瑞氏(Wright)染色Wright和Giemsa都是在Romanowsky染色法基础上演变而来，都是含有伊红和美蓝的复合燃料。瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物、排泄物等涂片中各种细胞的染色。特点：①将固定和染色和在一起进行，②操作简单，染色时间短，③对WBC胞质中的特异性颗粒着色较好，但对核的着色略差。由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复

7、合染料。伊红是钠盐，有色部分为阴离子，美蓝是氯盐，有色部分为阳离子。美蓝和伊红的水溶液混合后，产生一种不溶于水的伊红化美蓝（ME）中性沉淀，即瑞氏染料。将瑞氏染料用适量甲醇溶解，即成为瑞氏染液甲醇MEM++E-瑞氏染液Wright染液配制：瑞氏染粉0.1g甲醇（AR）60.0ml①研磨法；②直接溶解法配好的染液置室温一周后使用，时间越长效果越好，久置时应密封，防止甲醇挥发和氧化，也可加甘油3ml，防挥发且细胞着色清晰甲醇作用：①作为溶剂:②能将