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1、高效液相色谱法测定活血通络丸中紫丁香苷的含量【关键词】活血通络丸；高效液相色谱法；紫丁香苷；含量测定Abstract：ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthecontentdeterminationofsyringininHuoxueTongluoPill.MethodsChromatographicassayedonKromasilC18column(250mm×4.6mm,5μm)atroomtemperature,andthemixturesolutionofacetonitrile-1%aqueousaceticacid(10∶90,v/v)o
2、bilephase.ThefloL/min.Thedetection.ThesamplesizeL.Theaveragerecoveryethodissimple,accurateandtheresultsarestableethodcanbeusedforthecontentdeterminationofsyringininHuoxueTongluoPill.Keyination活血通络丸系武威市凉州区中医院经多年临床经验研制的医院制剂,由丹参、祖师麻、鸡血藤、乳香、没药、黄芪等11味中药组成的中药复方制剂,具有化痰祛瘀、通络止痛的功能,用于风湿、类风湿性关节炎所致的肌肉、关节刺痛,
3、部位固定不移,甚至关节变形、僵硬、肢体麻木等。经临床多年使用,疗效显著。祖师麻为方中主药之一,紫丁香苷为其有效成分之一。为有效控制该制剂的质量,本试验采用高效液相色谱(HPLC)法,建立了活血通络丸中紫丁香苷的含量测定方法,为活血通络丸质量标准的研究与指标的制定提供了试验依据。 1仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪(包括：G1314AV-DR型电子分析天平；HS10260D超声波清洗器(天津市恒奥科技发展有限公司)。 紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号111574-200502,供含量测定用)；活血通络丸样品(批号070410、070423、070514)及阴
4、性对照样品均由武威市凉州区中医院制剂室提供。水为重蒸馏水,乙腈为色谱纯,其它试剂、试药均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件及系统适用性试验色谱柱：KromasilC18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-1%冰醋酸(10∶90)；流速：1.0mL/min；检测波长：270nm；柱温：室温；进样量20μL。在此色谱条件下,取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20μL分别进样,结果供试品色谱中,紫丁香苷峰与相邻峰达到基线分离,且阴性对照无干扰,其峰形对称,分离效果良好。见图1。 2.2对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷对照品2.65mg,置于50mL量瓶中,加
5、甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.053mg/mL的甲醇溶液。再精密量取4mL置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成含紫丁香苷0.0212mg/mL的对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备 取活血通络丸,研细,取粉末(过40目筛)约4g,精密称定,置具塞锥形瓶中。精密加入甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率250in,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过。精密量取续滤液40mL,水浴蒸干,残渣加50mL水使溶解,移置分液漏斗中,用氯仿提取2次,每次25mL。弃去氯仿层,水层用水饱和的正丁醇提取4次,每次25mL。合并正丁醇提取液,用10mL水洗1次,分取正丁醇层,
6、置蒸发皿中,水浴蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中,作为供试品溶液。用0.45μm微孔滤膜过滤后备用。 2.4阴性对照品溶液的制备取不含祖师麻的阴性样品,按“2.3”项下方法,制得阴性对照品溶液。 2.5线性关系的考察精密吸取紫丁香苷浓度为0.053mg/mL的甲醇溶液1、2、4、6、8、lOmL,分别置于10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归,得回归方程为A＝9906.6C＋5271.5,r＝0.9999。表明紫丁香苷浓度在5.3～53μg/mL范围内线性关系良好。 2.6精密度试验精密吸取对照品溶液20μ
7、L,重复进样5次,计算5次峰面积的RSD＝1.16%。取活血通络丸(批号070410),平行做6份样品,按样品测定法测定,计算紫丁香苷含量,结果RSD＝2.13%,表明方法重复性较好。 2.9加样回收率试验 采用加样回收法,取已知含量的活血通络丸(批号070410,含量0.063mg/g)6份,精密称定,分别精密加入紫丁香苷标准品溶液(0.053mg/mL)2mL,按“2.3”项下方法制备,在上述色谱条件下测定紫丁香苷的含量,结果平均回收率
