反相高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量

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1、反相高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量【摘要】目的建立半枝莲药材中原儿茶酸的含量测定方法。方法样品用30％的乙醇回流提取，提取液滤过，以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定。用DiamonsilTMC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-0.05％磷酸为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长为258nm。结果原儿茶酸的保留时间约为7min，且与其它峰的分离度大于1.5。原儿茶酸的线性范围为0.018～0.184μg（r=0.9998），最低检测限为3ng，平均回收率和RSD分别为99.7%和0.27%。结论该方法简便快速，结果准确可靠，可为半枝莲药材的质

2、量评价提供有效手段。【关键词】反相高效液相色谱法半枝莲原儿茶酸含量测定　　RP-HPLCDeterminationofProtocatechuicAcidinScutellariabarbara　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodtodeterminethecontentofprotocatechuicacidinScutellariabarbara.MethodsThesampleinationofprotocatechuicacidinScutellariabarbata.ThechromatographicprocedureonsilTMC1

3、8asananalyticcolumnandamixtureof25volumeofmethanol,75volumeof0.05%phosphoricacidasamobilephaseataflol·min-1.Thedetection.ResultsThepeakofprotocatechuicacidappearedforabout7minutes.Resolutionofprotocatechuicacidorethan1.5anditslinearrangeinimumlimitofdetectionethodissensitiveandquickandcanbeusedfo

4、rthequalitycontrolofScutellariabarbara.　　KeypoonsilTMC18分析柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸；流速：1.0ml·min-1；检测波长：258nm；进样量均为20μl；灵敏度：2.0AUFS。在以上色谱条件下，样品中原儿茶酸与其它组分的色谱峰分离度良好。见图1。　　2.2供试品溶液的制备取本品粉末（过60目筛）约2g，精密称定，置50ml圆底烧瓶中，精密加入30%乙醇25ml，称定重量，回流1h。放冷，称定重量，用30%乙醇补充减失的量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。　　2.3对照品贮备液

5、的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.092mg的溶液，即得。　　2.4标准曲线的绘制及线性范围分别精密量取原儿茶酸对照品贮备液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.0ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得不同浓度的对照品溶液。分别吸取20μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量X（μg）为横坐标，峰面积（×107）Y为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理得回归方程为：Y＝4.0946X－0.0014，r＝0.9998（n＝6）。原儿茶酸在0.018～0.184μg范围内线性关系良好。　　2.5稳定性实验分别于0，2，4，6，8，24h精密吸取

6、供试品溶液，进样测定，按上述色谱条件测定峰面积。供试品溶液于24h内，色谱峰面积无明显变化，RSD为0.63%。结果表明在24h内供试品溶液稳定。　　2.6精密度实验精密吸取上述供试品溶液，连续进样6次，按上述色谱条件测定峰面积。原儿茶酸峰面积的RSD为0.41%，表明该法的精密度良好。　　2.7重复性实验取同一批半枝莲药材粉末（过60目筛）约2g，共6份，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算含量，其RSD为0.86%，表明该法重现性良好。　　2.8最低检测限实验取上述对照品贮备液，逐步稀释，进样，直至信噪比S/N≥3，此时进样量即为最低检测限。原儿茶酸

7、的最低检测限为3ng。　　2.9回收率实验取已知原儿茶酸含量为59.61μg·g-1的半枝莲药材粉末（过60目筛）约1g，共6份，精密称定。分别精密量取上述原儿茶酸对照品储备液0.7ml，加入上述6份药材中，按“2.2”项下方法操作制备供试品溶液。测定其平均回收率为99.7%，RSD为0.27%。可见本方法的准确度高，精密度好，方法可行。　　2.10样品测定取24批半枝莲药材粉末（过60目筛）约2g，精密称定，按“2.2”项下制备供