高效液相色谱法测定银芍颗粒中绿原酸的含量

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1、高效液相色谱法测定银芍颗粒中绿原酸的含量【摘要】　　目的建立银芍颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定该药中绿原酸的含量,色谱条件：AgilentZOBAXSB-C18(250mm×3.0mm，5μm)色谱柱,乙腈－0.4%磷酸水溶液（9∶91）为流动相；流速：1.0ml·min-1；检测波长327nm。结果绿原酸浓度范围在0.0025～0.04μg之间峰面积与浓度线性关系良好，r=0.9999，平均回收率99.6%,RSD=1.07%。结论该方法准确、可靠、专属性强,可用于银芍颗粒的

2、质量控制。【关键词】银芍颗粒绿原酸高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofthecontentofchlorogenicacidinYinshaoGranulebyHPLC.MethodsThecontentofchlorogenicacidinYinshaoGranuleinedbyHPLC.Thechromatographicconditionsm×3.0mm，5μm)asanalyticcolumn,aceto

3、nitrile-0.4%phosphoricacid(9∶91)asmobilephase,theflol·min-1，andthedetection.ResultsThelinearityofchlorogenicacidethodisaccurate,reliable,specific,andcanbeusedforthequalitycontrolofYinshaoGranule.　　Keyg，瑞士）；AgilentZOBAXSB-C18(250mm×3.0mm，5μm)色谱柱。　　1.2试剂与

4、药品　　绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110753-200413）；银芍颗粒(银芍颗粒由华中科技大学协和医院药剂科自制，批号20061105,20061107,20061108，20061110，20061112)。乙腈（色谱纯，上海凌峰化学试剂有限公司），磷酸（色谱纯，上海凌峰化学试剂有限公司），水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　AgilentZOBAXSB-C18(250mm×3.0mm，5μm)色谱柱；流动相为乙腈－0.4%磷酸水溶液（9∶91

5、）(V/V)；检测波长为327nm；流速1.0ml·min-1；进样量10μl；柱温为30℃；理论板数按绿原酸峰计算，应不低于5000。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备　　精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥的绿原酸对照品适量，置1ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每毫升中含绿原酸2.5μg的对照品溶液。　　2.2.2供试品溶液的制备　　取银芍颗粒适量，研细，取1.5g，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，放置15min，取续滤液，置棕色具塞锥

6、形瓶中，即得。　　2.2.3阴性溶液的制备　　按处方比例和工艺，制成不含金银花药材的阴性样品，按“供试品溶液的制备”制备方法，同法制成阴性对照溶液。　　2.3阴性干扰实验　　分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1～3）。结果表明，供试品色谱图中，在与对照品色谱峰相应的位置上有相同的色谱峰，主峰与其它色谱峰达到基线分离，阴性对照无干扰。　　2.4线性关系的考察　　分别精密吸取绿原酸对照品溶液1.0，2.0，4.0，8.0，16.0μl，依次注入液相

7、色谱仪中，按上述色谱条件测定，以进样量为横坐标，相应的峰面积值为纵坐标，计算得线性回归方程为：Y=5386.1377X+3.2912,r=0.9999。结果表明，绿原酸进样量在0.0025～0.04μg浓度范围内与吸收峰峰面积值呈良好的线性关系。　　2.5精密度考察　　　精密吸取对照品溶液10μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，连续进样5次，记录峰面积分别为162.1801，161.9542，163.0421，162.8744，160.9808。RSD为0.51%，说明仪器性能良好。　　2.6稳定性实

8、验　　　取同一供试品溶液按上述色谱条件，于0，3，6，9，12，24h按上述色谱条件各进样1次，测定峰面积，分别为141.0038，139.0754，136.0631，135.2203，135.0439，132.2222。结果RSD为2.30%，说明测定时间内供试品稳定。2.7重现性实验　精密称取同一批号的银芍颗粒样品(批号20061105)共5份，按含量测定项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件注入液相色谱仪，结果5次绿原酸的含量为0.00547%，