实验五大黄中游离蒽醌的提取

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1、实验五大黄中游离蒽醌的提取大黄为寥科植物掌叶大黄(RheumPalmatumL.),药用大黄(R.officinaleBeill)和唐古特大黄(R.tanguticumMaxim.exBalf)的根及根茎。是泻下、健胃、清热、解毒的常用屮药。大黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，它们在植物中主要以甙的形式存在，总含量为2-5%,大黄中主要的羟基蔥醌类化合物有大黄酚(1)、大黄素(2)、大黄酸(3)、大黄素甲醚(4)、芦荟大黄素(5)及其甙类。R1R2大黄酚OHOOHHCH3OHCH3HCOOHOCH3CH3HCH2OH'大

2、黄素大黄酸RR2大黄素甲醚芦荟大黄素大黄酪(Chrysophanol)为金黄色片状结晶(乙醇或苯)，mp.196-197°C，能升华，可溶于丙酮、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水、碳酸钠和碳酸氢钠水溶液。大黄素(Emodin)为橙黄色针状结晶(乙醇或冰醋酸)，mp.256—257°C，能升华，易溶于稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液，可溶于乙醇、丙酮，在△醚、氯仿、苯、四氯化碳、二硫化碳等溶剂中溶解度较小，几乎不溶于水。大黄酸（Rheine）为黄色针状结晶（升华法），mp.321

3、—322°C，330°C分解，易溶于碱水液、吡啶，微溶于乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、苯、石油醚。几乎不溶于水。大黄素甲醚（Physcion）砖红色针状结晶（苯），mp.203-207°C，能升华，溶解性质与大黄酚相似。芦荟人黄素（Aioeemodin）为橙黄色针状结晶（甲苯），mp.223-224°C，能升华，可溶于乙醚、热乙醇、苯、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液。羟基蒽醌甙有大黄素甲醚葡萄糖甙，大黄素葡萄甙，大黄酸葡萄糖甙,大黄酚葡萄糖甙，大黄素-1-O-B-D-葡萄糖式，芦荟大黄素-u-0-B-D-葡萄糖甙。一、实验

4、目的1.学会PH梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术。2.学会两相酸水解法的操作技术。3.学会柱色谱的操作技术。4.学会羟基蒽醌类成分的化学检识及薄层足析检识方法。二、实验原理本实验利用大黄中的羟基蒽醌经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于三氯甲烷而被提出；再利用各羟基蒽醌类化合物酸性不同，采用PH梯度萃取法结合柱色谱法分离而得到大黄素单体。三、实验内容（一）游离蔥醌的提取取大黄粗粉50g,置于500ml的园底烧瓶中，加氯仿——20%硫酸（5:1）300ml，水浴加热回流3〜4小时，纱布过滤，放冷减压抽滤，得到氯仿液。

5、（二）ph梯度萃取法分离1.将上述氯仿液转移至500ml的分液漏斗屮，加5%碳酸氢钠水溶液80ml（先用pH试纸测定其pH值）分三次萃取（注意萃取时放置分层的时间应稍长些，以免萃取效果不好），合并三次碳酸氢钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2〜3（观察萃取，酸化时溶液的颜色变化），放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，则其主要含大黄酸，留作鉴定用。2.将上述经碳酸氢钠萃取过的氯仿液用5%碳酸钠水溶液100ml（先用pH试纸测定其pH值）分三次萃取，合并碳酸钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2〜3,放置

6、沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，则其主要含大黄素，留作分离用。3.将上述经碳酸钠萃取过的氯仿液用5%氢氧化钠水溶液100ml（先用pH试纸测定其pH值）分3次萃取，合并氢氧化钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至PH2〜3,放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，则其主要含大黄酚、芦荟大黄素和大黄素甲醚，留作鉴定用。（三）柱色谱精制大黄素1.湿法装柱取柱层析用硅胶10g,加130ml（PE:EtOAc=7：3）混合溶剂搅拌均匀，装入合适的色谱柱中，并用相同的混合溶剂洗脱至液面不再发生变化2.湿法上样将上述大黄素

7、的粗品溶于少量(PE:EtOAc=7：3)混合溶剂屮，用滴管滴于色谱柱的顶端。3.洗脱4.TLC检识将相同的流份合并，回收溶剂，即得纯品大黄素。(四)检识1.碱液试验：取上述分离所得游离蔥醌类化合物结晶各5mg置于小试管中，力U95%乙醇lml溶解，再加10%氢氧化钠水溶液2〜3滴，观察溶液颜色变化。凡具有邻、对位酚羟基的蔥醌类化合物应呈紫-蓝色，其它羟基蒽醌类化合物多为红色。2.醋酸镁试验：取上述分离所得游离蔥醌类化合物结晶各5mg置于小试管中，加95%乙醇lml溶解，再满加0.5%醋酸镁乙醇液2〜3滴，观察溶液颜

8、色变化。凡具冇羟基的蒽醌类化合物应呈橙红色，具冇间位二羟基的蔥醌昆类化合物应呈橙-红色，具有对位二羟基的蔥醌类化合物应呈紫-红紫色，具有邻位二羟基的蒽醌类化合物应呈蓝紫色。3.蔥醌类成分的薄层层检识吸附剂：硅胶CMC-Na硬板，于110QC烘半小时。样品：a.自制大黄酸丙酮溶液b.大黄酸标准品丙酮溶液c.大黄素结晶丙酮溶液d.人黄素标准品丙酮溶