多肽结构测定

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1、教学目标：多肽结构的测定方法教学重点：了解末端残基分析法测定肽中氨基酸的排列顺序教学安排：O1，O5—>O6；10min一、概述　　多肽与蛋白质都是由α-氨基酸为结构单元，它们之间无严格界线。一般认为相对分子质量<1万，能透过半透膜，不被三氯乙酸或浓硫酸所沉淀的为多肽。　　多肽广泛存在于自然界，在生物体内起着重要作用，如谷-胱-甘肽保护人体免受毒素对细胞的侵袭，延缓人体衰老。　　对肽的研究有两方面工作：测定肽的组成和α-氨基酸在肽链中排列顺序；合成多肽，保证测定结果的正确性，多肽结构测定大体分三步。1.测定实

2、验式　　将肽在酸性溶液中彻底水解，用色谱法分离确定氨基酸的种类、相对含量，计算出各种氨基酸的相对数目，求出实验式。2.确定分子式　　用化学方法或物理方法测定其相对分子质量，从而确定分子式。3.末端残基分析法，测定多肽中氨基酸的结合顺序二、N端氨基酸分析　　有两种方法进行N端氨基酸的分析1）彻底水解法　　用2，4-二硝基氟苯与多肽的N端氨基反应，然后彻底水解产物，可确定N端的氨基酸：　　　　这种方法可以一次得到全部氨基酸分子，也可确定N　端氨基酸的组成。2）埃德曼（Edman）降解法　　用异硫氰酸苯酯与多肽的N

3、端氨基反应，然后水解产物，得到N端氨基酸和少一个氨基酸结构单元的多肽，分析N端氨基酸结构，回收少一个氨基酸的多肽。再重复操作，逐步确定N端氨基酸结构，经过多次降解，可确定多肽的氨基酸种类和连接顺序：　　　　　　（苯基乙内酰硫脲）催产素加压素三、C端氨基酸的分析　　在羧肽霉作用下水解，有选择的使游离羧基的α-氨基酸的酰胺键水解，对水解下来的氨基酸进行鉴定，确定结构：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（降解后的多肽）　　经过反复多次降解，可以逐步把多肽的链结构顺序弄清楚。　　对于长的肽链可以先降解成

4、较短的多肽，然后再进行N端或C端分析法，得到多肽中氨基酸连接的顺序。催产素和加压素都属九肽，经分析结构如下：