浅论凋亡细胞促进狼疮性bxsb小鼠发病的探究

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1、浅论凋亡细胞促进狼疮性BXSB小鼠发病的探究　　浅论凋亡细胞促进狼疮性BXSB小鼠发病的探究　　浅论凋亡细胞促进狼疮性BXSB小鼠发病的探究　　浅论凋亡细胞促进狼疮性BXSB小鼠发病的探究【摘　要】　目的　探索凋亡细胞在系统性红斑狼疮发病中的功能。方法　将体外诱导的凋亡胸腺细胞经腹腔注射给同基因同性别的正常C57小鼠和具有狼疮倾向的雌雄BXSB小鼠；检测血清中IgM和IgG类型的抗dsDNA抗体和抗ssDNA抗体的水平，尿蛋白浓度以及肾脏中IgG类型免疫复合物的沉积。结果　用凋亡胸腺细胞免疫后，诱导C57小鼠产生IgG类型的抗dsDNA抗体和抗s

2、sDNA抗体；相比之下，诱导雌性BXSB小鼠产生高水平的IgG类型抗dsDNA抗体和抗ssDNA抗体；并且使雄性BXSB小鼠的尿蛋白浓度明显升高。结论　凋亡细胞具有免疫原性，它可能是狼疮性BXSB小鼠体内自身抗原的主要；狼疮性遗传因素和Yaa基因能促进凋亡细胞的免疫原性和增强凋亡细胞的致肾炎功能。　　现在普遍以为系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制涉及多环节，并受遗传因素的控制和环境的影响［1］。自身抗体的产生和免疫复合物的形成是狼疮性免疫复合物型肾炎等免疫病理改变的直接原因。动物实验结果提示，狼疮性小鼠IgG类型的抗DNA抗体是自身抗原诱导的特异

3、性体液免疫应答的结果［2］。体内的染色质(chromatin)及核小体(nucleosome)可能是主要的自身抗原［3］，但其产生不清楚。最近，我们实验室发现发病的狼疮性雄性BXSB小鼠的凋亡B细胞数目异常升高［4］。另有报道，在体外SLE病人的凋亡淋巴细胞也异常增加［5］。基于上述现象，我们分别将凋亡的胸腺细胞经腹腔注射给同基因(syngeneic)同性别的正常C57小鼠和处于发病之前的狼疮性遗传倾向的雌雄BXSB小鼠，人为地增加体内凋亡细胞的数目，以探索凋亡细胞和自身抗体产生和肾炎病变的关系，以及在此过程中狼疮性遗传因素的影响。　　1　材料和

4、方法　　1.1　实验动物：4周龄C57小鼠，购自中国科学院遗传学探究所；4周龄雄性和雌性BXSB小鼠，由北京医科大学第三临床医学院皮肤科陈学荣教授自美国Jackson实验室引进，本室饲养繁殖。　　1.2　凋亡细胞的诱导及收集：取同基因同性别的4周龄小鼠的胸腺细胞，用含10黃(hyclone)的RPMI-1640培养液配成1×107/ml浓度，加地塞米松(Dex)至10－5mol/L浓度，在37℃，5CO2的条件下，诱导细胞凋亡24h。然后，收集胸腺细胞，用RPMI-1640培养液洗涤3次。经PI染色，用流式细胞仪检测亚二倍体细胞数作为胸腺凋亡细胞

5、的数目。　　1.3　免疫过程：分别将4周龄C57小鼠和雌雄BXSB小鼠随机分成两组，即实验组和对照组，每组5只小鼠。实验组每只小鼠经腹腔注射0.2ml体积的含5×107同性别同基因的凋亡胸腺细胞。每隔10d注射1次，共注射免疫3次。对照组每只小鼠经腹腔注射0.2ml体积的RPMI-1640培养液，注射的次数及间隔时间同实验组。　　1.4　免疫学检测：末次注射的10d后，留取实验组和对照组小鼠的血清、尿液和肾脏。　　血清作1∶50稀释，用ELISA法检测IgM和IgG类型的抗ssDNA和抗dsDNA抗体，其浓度以ELISA底物显色的A值示之。　　用

6、考马斯亮兰G-250液测定尿液中尿蛋白浓度［6］，作为肾炎有无或程度的指标。　　用二乙酰单肟法测定血清中尿素氮(BUN)的浓度，作为肾功能状态的指标。试剂盒购自北京北化精细化学品公司临床诊断试剂分厂，实验方法按说明书进行。　　留取的肾脏经冰冻切片后，用免疫荧光法［7］检测肾脏有无IgG类型免疫复合物(IC)的沉积。　　2　结　　　果　　2.1　IgM类型抗DNA抗体的水平：胸腺细胞经10－5mol/LDex诱导24h后，PI染色，用FACS检测，发现约83细胞是亚二倍体的凋亡细胞。各个实验组小鼠和相应的对照组小鼠血清中IgM类型的抗dsDNA和抗

7、ssDNA抗体水平差异无明显性(P＞0.05)。并且，正常C57小鼠和雌雄BXSB小鼠的血清中IgM类型的抗dsDNA和抗ssDNA抗体水平相似。　　2.2　凋亡细胞诱导IgG类型抗DNA抗体的产生：在实验组的正常C57小鼠和雌性BXSB小鼠的血清中，IgG类型的抗dsDNA和抗ssDNA抗体水平非常明显地高于各对照组小鼠(P＜0.001)。但是，实验组雌性BXSB小鼠和对照组雌性BXSB小鼠相比，前者血清中IgG类型的抗dsDNA和抗ssDNA抗体的均匀水平(A值)比后者分别增加了1.593和2.0513；而实验组C57小鼠和对照组C57小鼠相

8、比，前者的血清中IgG类型的抗dsDNA和抗ssDNA抗体的均匀水平(A值)比后者分别增加0.685和0.8984。显然，实验组雌性BX