杨月红进行性肌营养不良症（dmd）基因检测课件

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1、医学遗传学实验进行性肌营养不良症（DMD）基因检测第三次实验内容实验目的：通过对进行性肌营养不良症基因检的实验，掌握一种简便检测基因缺失突变的方法实验原理：通过聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR），结合琼脂糖凝胶电泳技术，检测进行性肌营养不良症(Duchennemusculardystrophy，DMD)致病基因外显子缺失突变。琼脂糖凝胶电泳技术DMD是一组原发于肌肉组织的遗传病。DMD基因定位于Xq21.2-21.3之间，全长2450kb左右，是人体最大的基因，大约占X染色体的1%。有79个外显子组成，编码1个3685个氨基酸

2、、分子量为427kD的蛋白质-----抗肌营养不良蛋白(dystrophin)，这种蛋白具有稳定细胞膜和细胞内钙调节的功能。该基因有多种突变形式，60％是外显子缺失突变，5％是重复突变，另35％可能是很小的DNA片段缺失或点突变。通常选择DMD基因中9个缺失热点的外显子扩增，可检出缺失突变中的90%。DMD基因4个外显子的引物序列本实验设计为扩增DMD基因中4个外显子，其中外显子45和48在中国患者中的检出率分别为26%和48%。实验步骤：采血DNA抽提PCR电泳观察结果实验方法：多重PCR双蒸水17.8l10xBuffer2.5lMgCl22ldNTPs

3、0.5lPrimerR+F(混合)1.4lDNA模板0.5lTaq-DNA聚合酶0.3l石蜡油1滴10lPCR产物混匀加样电泳(140V,2hr)紫外灯下观察2l6*loadingbuffer实验结果与分析2.人类染色体核型分析●实验目的：通过实验掌握染色体核型分析的常用方法以及Ｇ分带的带型特征，初步会识别Ｇ分带人类染色体。核型:将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来构成的图象实验原理实验原理：人类染色体Ｇ带1P331q32人类染色体Ｇ带49,xxxxx12345——————A————————B——6789101112————————————C—

4、————————————1314151617181920———D——————E——————F——2122—G—性染色体作业核型：46，XYThankyou