高效液相色谱法测定巴豆中巴豆苷的含量

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1、高效液相色谱法测定巴豆中巴豆苷的含量：凌云,赵红玉,潘兴亮,周春祥【摘要】目的：建立用高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）测定巴豆中巴豆苷含量的方法。方法：采用反相HPLC，色谱柱为汉邦HederaODS2（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈甲醇水（1︰4︰95），流速为1mL/min，检测波长292nm，柱温25℃，进样量10μL。结果：该方法的线性范围为0.161～0.967mg，r=0.9998(n=6)；平均回收率为98.78%，峰面

2、积相对标准差为0.02%。结论：该方法简便、准确、重现性好，可用于巴豆药材中巴豆苷的定量测定。【关键词】高效液相色谱法;巴豆;巴豆苷　　Methods:Thedeterminationanceliquidchromatographyn(4.6mm×250mm,5μm).ElutionployedobilephaseofacetonitrilemethanolL/min.Thedetectionandthecolumntemperaturee0.161to0.967mg.Thecorrelationcoefficient

3、ofthecalibrationcurvesethodissimple,accurate,andrepeatable,anditissuitableforqualitycontrolofSemenCrotonisTiglii.　　Keyanceliquidchromatography;SemenCrotonisTiglii;isoguanosine　　巴豆为大戟科植物巴豆CrotontigliunL.的干燥成熟果实，始载于《神农本草经》，列为下品。其性热味辛，有大毒，归胃、大肠经，泻下作用猛烈，外用于恶疮疥癣，疣痣［1］。

4、现代药理研究表明巴豆主要具有致炎、致泻［2，3］，促肿瘤发生［4］，降低机体免疫功能［5］及抗肿瘤作用［68］。既往对其化学成分的研究主要集中于对巴豆油的分析，如有报道用气相色谱质谱联用仪采用面积归一化法确定巴豆和巴豆霜中挥发性成分的相对百分含量［9］。2005年版《中国药典》中仅有巴豆油含量测定［1］，未曾收载有关巴豆的毒性成分如巴豆毒素、巴豆苷、牵牛子苷的含量标准和使用限量等方面的内容，而作为一味临床较为常用的有毒中药，使用稍有不慎，极易引发中毒事件，不利于临床安全用药。同时，由于其质量控制标准的欠缺，使得医务工投

5、鼠忌器，限制了巴豆药材在临床上的应用。由于巴豆中的毒性成分在某些病理状态下也是其发挥疗效的有效成分，因而更有必要对其展开研究。虽有文献报道巴豆苷、巴豆毒素的提取及药理活性研究［10，11］，但至今尚未有测定这些成分的方法报道。本研究采用高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）对10批次不同产地的巴豆中巴豆苷含量进行测定，从而为有效地控制巴豆药材质量提供依据。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂Agilent1100液相色谱仪［包括四元梯度泵、自动进样器、恒温柱温箱

6、、二极管阵列检测器（diodearraydetector，DAD）和AgilentChemstation色谱工作站］，美国Agilent公司生产；AG285电子天平，瑞士Mettler公司生产；KQ500E型超声波清洗器，江苏昆山超声仪器有限公司生产。乙腈、甲醇为色谱纯，实验用水为三蒸水。　　巴豆药材080815批次和080816、080817批次产地分别为广西、四川，购于浙江中医药大学中药饮片厂；080301批次购于河北安国市神禾中药材饮片有限责任公司，产地为四川；20081145、20081028和20080906批

7、次购于云南向辉生物科技有限公司，产地皆为云南；081206、090205、090210批次购于山东鲁安中药饮片有限公司，产地分别为四川、云南、甘肃。以上药材均由南京中医药大学生药学教研室吴德康教授鉴定为大戟科植物巴豆CrotontigliunL.的干燥成熟果实。巴豆苷对照品（成都普思生物科技有限公司，批号为090302）用HPLC面积归一化法测定其纯度≥98.5%。　　1.2实验方法　　1.2.1色谱条件汉邦HederaODS2色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈甲醇水(1︰4︰95)，流速为1mL

8、/min，检测波长292nm，柱温25℃，进样量10μL。　　1.2.2系统适应性实验十八烷基硅烷键合硅胶（octadecylsilanechemicallybondedsilica，ODS）为填充剂，理论塔板数按巴豆苷峰面积计算应不低于5000，巴豆苷与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，色谱峰拖尾因子在