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1、高效液相色谱法测定郁李仁中苦杏仁苷的含量：钱平,贾云,刘志辉,钱芳【摘要】目的建立高效液相色谱法测定郁李仁中苦杏仁苷含量的方法。方法色谱柱：SupelcoODSC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-水(20∶80)；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；检测波长：210nm。结果苦杏仁苷峰分离良好,苦杏仁苷浓度在0.06613～4.232μg间线性关系良好,r＝1.0000,平均回收率为95.91%(RSD＝2.29%)。结论本方法准确、可靠,可用于郁李仁中苦杏仁苷的含量测定。【关键词】郁李仁；苦杏仁苷；高效液相色谱法；含量测定Abstract：Obj
2、ectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofamygdalininSemenPruni.MethodsTheanalyticalcolumnn(4.6mm×250mm,5μm),ethanol-obilephase.ThefloL/min,andthedetection.ResultsThelinearrangeforamygdalinethodisaccurateandreliable,andcanbeusedinthedeterminationofamygdalininSemenPruni.KeyenPruni；a
3、mygdalin；HPLC；contentdetermination郁李仁为蔷薇科植物欧李PrunushumilisBge.、郁李PrunusjaponicaThunb.或长柄扁桃PrunuspedunculataMaxim.的干燥成熟种子,前二者习称“小李仁”,后者习称“大李仁”,具有润燥滑肠、下气、利水的功效[1]。苦杏仁苷为郁李仁的主要成分之一,2005年版《中华人民共和国药典》在该药材含量测定项下采用银量法测定,但银量法属于间接测定方法,影响因素多,而目前采用其他方法对郁李仁进行含量测定的报道较少。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法直接测定郁李仁中苦杏仁苷的含量,
4、方法准确、可靠,为郁李仁中苦杏仁苷的含量测定提供了依据和参考。 1仪器与试药 1.1仪器 pom×250mm,5μm)；流动相：甲醇-水(20∶80)；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；检测波长：210nm,进样量：20μL。色谱图见图1。 2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的苦杏仁苷对照品42.32mg,置10mL量瓶中,用70%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得苦杏仁苷4.232mg/mL的对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备取郁李仁粗粉0.3g,精密称定,置具塞三角烧瓶中,加石油醚(60～90℃)50mL,回流提取1h,过滤,以石
5、油醚分3次洗涤滤渣及容器,每次10mL,弃去石油醚液,滤纸及滤渣挥干溶剂,置原容器中,精密加入70%甲醇溶液50mL,精密称定,回流提取1h,放冷至室温,再称重,用70%甲醇补足失重,抽滤,精密量取续滤液5mL置10mL量瓶中,以70%甲醇稀释至刻度,以0.45μm滤膜滤过,取续滤液即得。 2.5精密度试验精密吸取同一供试品溶液重复进样6次,测得苦杏仁苷峰面积积分值的RSD＝0.86%。 2.6重复性试验取同一批次样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件测定,结果苦杏仁苷的平均含量为3.16%,RSD＝1.35%。 2.7稳定性试验取
6、同一供试品溶液于配制后0、2、4、6、8、10、24h测定,计算峰面积RSD＝1.11%,表明供试品溶液在24h内稳定。 2.8加样回收率试验精密称取已知含量的同一批次(批号080121)郁李仁粉末6份,每份约0.15g,脱脂后分别精密加入4.232mg/mL的苦杏仁苷对照品溶液1mL,依法制备供试品溶液并测定。结果见表1。表1加样回收率试验结果（略） 2.9样品含量测定分别测定了小李仁、大李仁药材各3批,采用外标法计算苦杏仁苷的含量,结果符合要求。表2样品中苦杏仁苷含量测定结果(略) 3讨论本研究试验了多种流动相比例和流速[2-6],采用甲醇-水(20∶80)作为
7、流动相,苦杏仁苷峰能较好分离,且出峰时间适当；水相中加入缓冲盐或酸对测定结果无明显影响,故水相选择纯水；色谱柱柱温设定25、35、40℃对分析结果无明显影响,故柱温设为25℃。 由于郁李仁中含有大量的油脂,如不除去测定时易引起干扰,且连续测定含油脂样品还可能引起色谱柱柱效降低,故提取前应先脱脂；文献报道[7]和本次试验结果均表明石油醚脱脂效果优于乙醚,故选择石油醚作为脱脂溶剂。苦杏仁苷易被苦杏仁苷酶水解,故一般测定时采用甲醇为提取溶剂,但甲醇提取液直接进行测定时,苦杏仁苷峰前拖尾现象严重,改用70%甲醇为提取溶剂时,峰形有很
