液相色谱串联质谱法测定兔血浆中葛根素的浓度

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1、液相色谱串联质谱法测定兔血浆中葛根素的浓度【关键词】液相色谱质谱法；葛根素；血药浓度　　Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCMSMSmethodfordeterminingthecontentofplasmapuerarin.MethodsTheplasmasamplepretreatedn（150mm×2.1mm，3.5μm）.Themobilephaseconsistedofmethanol10mmol·L-1NH4ACbufferacetonitrile（70∶20∶10）L·min-1.Thesamplemassspectrom

2、eter，then,itultiplereactionmonitoringmode.ResultsThereL-1(r=0.9986).ThedetectionlimitofthismethodL-1.TherecoveryandabsoluterecoveryatographypeaktRin.ConclusionThemethodissensitive，accurate，rapidandsuitableforthedeterminationofpuerarininhumanplasma.　　Keyatography-tandemmassspectrometry；puerarin

3、；plasmaconcentration　　葛根素（puerarin）是中药葛根的主要成分之一，具有扩张冠脉血管、降低血压和心肌耗氧量、抗心律失常等作用［1］。文献报道的葛根素血药浓度测定方法多数是高效液相色谱法［2-4］，但有时也难以满足药动学研究中微量血药浓度的测定要求，且分析用时较长。本文建立测定葛根素血药浓度的液相色谱串联质谱（LCMSMS）法，具有简便、灵敏度高、特异性强且检测快速等优点，适用于葛根素的药动学研究。　　1材料与方法　　1.1仪器与试药美国AB公司API3000型液质联用系统；RM）模式正离子检测，检测离子对：m/z417.2→267.2（葛根素），m

4、/z611.2→303.2（内标橙皮苷），辅助气化气流量：7500CC·min-1，雾化气流量：8L·min-1，气帘气流量：8L·min-1，碰撞气流量：6L·min-1，离子源喷雾电压：5500V，离子源雾化温度：350℃。　　1.3对照品及内标溶液的配制精密称取适量的葛根素对照品，用甲醇溶解并定容得160μg·mL-1的对照品溶液；精密称取适量的橙皮苷对照品，用甲醇溶解并定容得500ng·mL-1的内标溶液。　　1.4血浆样品处理固相萃取小柱用1.0mL甲醇活化和1.0mL双蒸水平衡，取血样300μL加入10mmol·L-1醋酸铵缓冲液300μL和内标溶液20μL，混匀后上样

5、，双蒸水1.0mL洗涤，0.5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于45℃水浴下用N2吹干浓缩，加入150μL流动相复溶，取5μL进样。　　2结果　　2.1方法专属性根据葛根素和内标物橙皮苷的子离子质谱扫描结果（见图1），分别选择特异的m/z417.2→267.2和m/z611.2→303.2用于定量监测。按照血浆样品处理方法和检测条件，空白血浆的色谱图、空白血浆加葛根素和内标对照品的色谱图、用药后血浆色谱图，分别见图2A、图2B和图2C。结果表明，葛根素和内标物的保留时间分别为1.67min和1.75min，血浆中无内源性物质和基质效应干扰，方法特异性强。　　图1葛根素（1）和橙皮苷（2）的

6、质谱子离子扫描图（略）　　Fig.1FullscanMS-MSspectraofpuerarin(1)andhesperidin(2)　　A.空白血浆;B.空白血浆加入葛根素和橙皮苷对照品;C.兔给药后血浆　　1.葛根素m/z417.2→267.2,tR=1.67min;2.橙皮苷m/z611.2→303.2,tR=1.75min　　图2血浆中葛根素和橙皮苷的色谱图（略）　　Fig.2ChromatogramsofpuerarinandhesperidininplasmabyLCMSMS　　2.2标准曲线及线性范围取空白血浆加入葛根素对照品溶液，配制成浓度为10、30、100、

7、300、1000、3000ng·mL-1的血浆标准曲线样品，按“1.4”项下方法操作，计算葛根素与内标峰面积比，得回归方程为：Y=0.00299C+000234，r=0.9986，权重1/X2。血浆中葛根素在10~3000ng·mL-1范围内与峰面积比线性关系良好，定量下限为10ng·mL-1。　　2.4提取回收率　　取空白血浆样品按“1.4”项下提取、吹干，然后加入分别含10、1500和2500ng·mL-1葛根素对照品的流动相150μL复溶(n=5)，使对照品溶