分子刺激朊蛋白质转化

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1、分子刺激朊蛋白质的转化很多证据支持这一假设的传染病的代理人朊病毒病是缺乏核酸，而是由一个特定的传染性蛋白。这种蛋白，朊病毒，似乎是由模板诱导构象变化的正常表达蛋白，朊（参考文献2）。虽然有无数的研究已经建立的转换X朊病毒作为中央致病事件的朊病毒疾病，它是未知是否之外的其他因素可能是基因的细胞为了促进有效的朊病毒蛋白生产。我们调查生物化学放大抗蛋白酶的prpsc-like蛋白（具有）使用一种修改台的可循环扩增method4。在这里，我们报告，计量转换X具有体外需要具体核糖核酸分子。值得注意的是，而哺乳动物核糖核酸制剂具有刺激体外

2、扩增，核酸准备从无脊椎动物物种不。我们的研究结果表明，编码的刺激分子可能有作用的朊病毒疾病的发病机制。他们还提供一个实用的方法提高诊断的灵敏度技术的基础上具有放大。我们以前表明，具有体外扩增股份许多具体特点与致病过程中的朊病毒传播在体内，包括应变和物种specificity3。在一个典型的扩增反应，稀释的朊病毒感染的脑组织匀浆（0.1%瓦特/五）和5%（瓦特/五）正常脑组织匀浆或缓冲控制和培养一夜之间在37转到。仓鼠sc237具有放大约6倍，在这些条件下（图1，comparemwith律师）。而生化特征要求具有放大的反应，我们

3、惊讶发现治疗的反应dnase-free，异构胰腺核糖核酸酶废除具有放大剂量依赖的方式（图1，第一面板）。在体外具有放大还废除治疗与纯化核糖核酸酶，核糖核酸酶，微球菌核酸，或benzonase（图1）。在控制实验中，我们发现，除了核糖核酸酶1小时后，一夜之间孵化并没有减少恢复已具有放大（补充图中）。相比之下，具有放大并不受此酶，这降低双链核糖核酸molecules5（德尚），或核糖核酸酶，其中特别劈开脱氧核糖核酸核糖核酸：hybrids6（图1b，第一和第二板）。两者合计，这些结果表明，单链（不锈钢）是需要具有放大在体外，但双链

4、RNA和核糖核酸：核酸杂交不。加入酶或限制性内切酶酶切并没有减少具有放大，显示是不需要的过程（图1b，第三和第四小组）。此外的酶磷酸双磷酸酶与肝素三也没有影响具有放大，这意味着既高能核苷酸和分子含有硫酸乙酰肝素所需的具有放大在体外（图1b，第五和第六小组）。在控制实验中，我们证实了退化的目标分子的每一个这些反应混合物通过使用适当的分析测定这些结构（补充图二）。确保商业酶制剂使用没有污染的蛋白酶，我们的水平来衡量的成立后，隔夜孵化与具有各种核酸。这些测量证实的基因（图2）和输入具有（图乙）均不受干扰的增加酶的抑制具有放大。作为一

5、个控制确认废除具有放大取决于刺激活性的抑制核酸，我们增加了benzonase，微球菌核酸和核糖核酸酶一具有扩增反应的酶不活跃状态。双方benzonase需要二价阳离子和微球菌核酸酶活动，所以我们灭活这些核酸增加5毫米乙二胺四乙酸。活性位点的酶acontains关键的组氨酸残基可以共价修饰的焦碳酸二乙酯（乙酯）。因此，我们处理的核糖核酸酶抑制核糖核酸酶乙酯活动，和删除多余的乙酯透析。我们的研究结果表明没有这三个核酸扩增的抑制具有无效的国家，支持这一假设的完整核糖核酸分子推动这一进程（图2）。要测试是否抑制具有扩增可能是介导的最终

6、产品的核糖核酸酶消化，我们直接测量影响循环20，30-guanidine磷酸（鸟苷）和30—磷酸胞苷（中医）上具有放大。既不这些核苷酸抑制在体外具有放大浓度为1毫米（图2）。我们的控制实验排除可能性污染蛋白酶，位阻，或消化产物帐户的抑制具有扩增的特异性核酸酶。两者合计，这些实验表明，核糖核酸是需要具有放大在体外。我们试图确定是否分离制备核糖核酸分子可以重建能力nuclease-treated正常脑组织匀浆放大具有。值得注意的是，总核糖核酸分离仓鼠大脑成功重组的benzonase-pre-treated脑匀浆放大能力具有以剂量依

7、赖的方式（图3）。相比之下，纯化硫酸乙酰肝素蛋白多糖（多糖）未能重建具有扩增（图3）。其他阴离子，如单链DNA（图3），多聚腺苷酸，硫酸乙酰肝素，戊聚糖聚谷氨酸和硫酸酸（数据未显示）也未能刺激具有放大。在这个和其他重建实验，benzonase—治疗控制车道有更大程度的具有放大比稀释痒病脑匀浆控制样品，表明，benzonase预处理反应是不完整的。根据经验，我们发现，它是必要的执行benzonase预处理反应在4控制避免变性成立后加入阴离子。估计分子大小的核糖核酸物种能够重组具有放大，我们分割的制备总仓鼠脑核糖核酸超滤通过滤波器

8、的相对分子量截止约100000（先生10万）。用琼脂糖凝胶电泳，我们发现所有的核糖体核糖核酸带的截留和所有的转移核糖核酸滤液（数据未显示）。使用这些样本，我们发现该过滤器截留能力再造具有放大一个水平略低于普通全脑核糖核酸。相比之下，滤液无法重建具有扩增（图3）。这些数据表明，