卵黄免疫球蛋白在医学免疫诊断和免疫治疗的应用

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1、卵黄免疫球蛋白在医学免疫诊断和免疫治疗的应用-->一、理化性质IgY为可溶性蛋白，亲水性比IgG好，且等电点较IgG低，约为5．2。IgY化学性质稳定:①耐酸性好，pH值＜3时失活。②耐碱。③稳定性好，在pH为8时，IgY与乳胶的复合物稳定性很好，可作为制备亲和层析柱纯化所需蛋白。Akita等使用IgY制备的亲和层析柱分离乳清和初乳中的IgG，1年多使用50余次，其结合力仅略有降低。④热稳定性好，巴氏消毒不会使其失活，－30℃和45℃亦不能使其变性。有研究表明，高糖溶液可有效提高IgY在高温(75～

2、80℃)、高压(5000kg/cm2)和低pH值(pH3)环境中的稳定性。免疫学特性Kronvall等和Akerstrom等分别证明，IgY不与蛋白A和蛋白G结合，是单克隆抗体和多克隆抗体检测的有力工具。20世纪90年代，研究者又发现IgY的其他免疫学特性:①不与类风湿因子结合。类风湿因子是一种自身抗体，可与IgG的Fc片段结合，产生假阳性反应。类风湿因子的干扰使免疫测定中易产生交叉反应。Larsson等利用夹心ELSIA证明，类风湿因子不与IgY结合，使用IgY作免疫检测可避免假阳性。②不激活补体

3、系统。新鲜的血清样品均含未激活的补体系统，通常IgG会激活补体系统，激活的补体组分与抗体结合，阻碍了抗体结合表位。而IgY则不激活补体系统，使用IgY可避免补体系统对固相免疫测定的干扰。③不结合细菌和哺乳动物细胞表面Fc受体，使得IgY在双重免疫组化方面比IgG更具优势。④与IgG几乎无交叉反应，常用于循环复合物的测定⑤使用少量抗原即可产生大量抗体。高度保守的哺乳动物蛋白在兔中不能引起免疫应答，但在鸟类中却很容易获得抗这些蛋白的抗体。对各种哺乳动物的抗原均有效，如总量30～475μg增殖细胞核抗原可

4、产生鸡抗弱免疫原性RNA多聚酶Ⅱ的抗体。二、IgY在医学领域中的应用IgY在人类医学、兽医学、食品科技和生物制剂等方面应用广泛。IgY可作为特异抗体已成为医学领域中新的研究热点。IgY在疾病相关蛋白检测中的应用:血浆白蛋白(HSA)和IgG等10种高浓度蛋白约占血浆总蛋白的90%，由于部分低浓度蛋白很可能是癌症、心肌梗塞等重大疾病的关键指示分子。如何祛除高浓度蛋白，检出低浓度蛋白，在疾病的早期诊断和疗效考核中具有重要意义。制备抗HSA和IgG的鸡卵黄抗体(IgY)，金磁微粒载体固定，可特异结合HSA

5、和IgG，以便除去血浆中大部分的HSA和IgG，使低丰度蛋白富集，有效提高低丰度蛋白的检出率，这为血浆蛋白质组学研究提供了一种新的方法。HbBart’S胎儿水肿综合征是最严重的一种α型地中海贫血病。从该病患者的红细胞溶解液中提取γ链四聚体(γ4，HbBartt’S)，免疫鸡获得特异IgY抗体，该抗体可特异结合γ球蛋白、HbBartt’S和血红蛋白F，用直接ELISA检测336份人红细胞溶血产物，其敏感性高达100%，特异性为96%，比传统渗透脆性试验法的特异性(约86%)高。该方法的建立有利于在地中

6、海贫血病流行的国家简单快速的检测α型地中海贫血病。IgY在病原体检测中的应用:疗效考核是目前日本血吸虫病免疫诊断的瓶颈，建立有效的评价方法是寄生虫学界广泛关注的问题。近两年已有研究者使用IgY以改进血吸虫病免疫诊断方法。即用纯化的抗可溶性虫卵抗原(SEA)的IgY为捕捉抗体，以酶标抗SEA单克隆抗体为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(S－ELISA)检测急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者和健康人的血清，其中急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者的血清循环抗原的阳性率分别为100%(9/9)和84．4

7、%(38/45)，特异性为96%(48/50)。而常用的间接血清凝集试验(IHA)的敏感性和特异性分别为69．6%和89．4%。可见前者比后者更具敏感性和特异性，为解决血吸虫病疗效考核的问题带来了希望。IgY在胃肠道疾病中的应用:最新研究显示，通过口服抗菌抗体或抗病毒抗体可替代抗生素药物而有效预防胃肠道感染。但传统的抗体生产工艺复杂，价格昂贵。而IgY因其便宜、易制备、稳定性好、耐酸和耐胃蛋白酶等优点成为制备口服抗体的最佳选择。如轮状病毒是致婴幼儿秋冬季腹泻的主要病原体，全球每年约有100万儿童患轮

8、状病毒性腹泻，至今尚缺乏有效的治疗手段。新药百贝宁主要成分是抗轮状病毒抗体(IgY)，治愈率高达88．9%，在临床应用中未发现有不良反应。IgY在呼吸道传染病中的应用:Nils-son等在瑞典对17例胆囊纤维症患者给予口服IgY以预防铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，通过长达12年的观察，发现17人中仅有2人有铜绿假单胞菌慢性植入情况，而对照组23人中却有7人。所有试验组患者肺功能均正常，且身体质量指数正常或接近正常。表明抗铜绿假单胞菌的特异