抗甲型肝炎病毒卵黄免疫球蛋白的制备及应用-论文.pdf

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1、中国生物制品学杂志2013年12月第26卷第12期ChinJBiologicalsDecember2013．Vo1．26No．12·1793·诊断制剂抗甲型肝炎病毒卵黄免疫球蛋白的制备及应用夏青娟，李树林，孟凡东3赵淑杰，徐晓霞，惠琪，刘令九1．长春生物制品研究所有限责任公司疫苗二室，吉林长春130062；2．中国生物技术股份有限公司营销中心预防制品部销售一部，北京100029；3．长春祈健生物制品有限公司疫苗一室，吉林长春130000摘要：目的制备抗甲型肝炎病毒(hepatitisAvirus，HAV)g[~黄免疫球蛋白(immunog1obulinofyo

2、lk，IgY)，并建立双抗体夹心ELISA法，用于测定甲肝疫苗中的HAV抗原含量。方法用纯化的HAV免疫健康产蛋母鸡，制备抗HAVIgY，采用多步骤分离纯化IgY，紫外分光光度法测定纯化IgY的蛋白含量，还原型SDS—PAGE分析IgY的相对分子质量及纯度，间接ELISA法检测IgY的效价、特异性及其热稳定性和酸碱稳定性。以纯化的IgY作为包被抗体，HRP标记的抗HAV单克隆抗体作为二抗，建立双抗体夹心ELISA法，对疫苗生产过程中的HAV抗原含量进行测定，并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果亲和层析纯化后的抗HAVIgY浓度为3．67mg／ml；

3、重链和轻链的相对分子质量分别为66000和27000，纯度为96．78％；效价最高为1：16000；纯化的抗HAVIgY只与HAV呈阳性反应，与脊髓灰质炎病毒和肠道病毒71(enterovirus71，EV71)均不反应；纯化的抗HAVIgY在2570℃条件下处理15min及经pH3．0～10．0的Tris—HCL缓冲液处理2h，其抗体效价基本无影响。建立的双抗体夹心ELISA法HAV浓度在15．62～2000．O0ng／ml范围内，HAV浓度的对数值与4值之间呈线性相关，R=0．935，最低检测量为7．81ng／ml，与市售试剂盒检测结果具有良好的相关性，相

4、关系数为0．9527。结论制备的抗HAVIgY浓度、纯度、效价均较高，特异性较强，稳定性良好，建立的双抗体夹心ELISA法可用于检测甲肝疫苗生产过程中HAV的抗原含量。关键词：肝炎病毒，甲型；免疫球蛋白Y；双抗体夹心酶联免疫吸附测定中图分类号：R373．2+1R392—33文献标识码：A文章编号：1004—5503(2013)12—1793—04Preparationandapplicationofimmunoglobulinofyolk(IgY)againsthepatitisAvirusXIAQing-juan，LIShu—lin，MENGFan—dong

5、，ZHAOShu-jie，XUXiao—xia，HUIQi，LIULing-jiu。ChangchunInstituteofBiologicalProductsCo．，Ltd．，Changchun130062，JilinProvince，ChinaCorrespondingauthor：LIULing-flu，E—mail：lj_liu_cc@163．cornAbstract：ObjectiveTopreparetheimmunoglobulinofyolk(IgG)againsthepatitisAvirus(HAV)anddevelopadon-blean

6、tibodysandwichELISAmethodforHAVantigencontentinHAvaccine．MethodsIgYagainstHAVwaspreparedbyimmunizinghealthylayinghenswithpurifiedHAV，purifiedbyseveralsteps，thendeterminedforproteincontentbyultravioletspectrophotometry，forrelativemolecularmassandpuritybyreducedSDS—PAGE，andfortiter，sp

7、ecificityaswellasheat，acidandbasestabilitiesbyindirectELISA．AdoubleantibodysandwichELISAmethodwasdevelopedusingthepurifiedIgYascoatingantibody，andHRP—labeledmonoclonalantibodyagainstHAVasthesecondaryantibody，andusedfordeterminationofHAVantigencontentinHAvaccineduringproduction，andth

8、eresultswerecompare