hplc法测定苦玄参中苦玄参苷ia的含量

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1、HPLC法测定苦玄参中苦玄参苷IA的含量【关键词】苦玄参；苦玄参苷IA；含量测定；高效液相色谱法【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationinpicriafel-terraeLour.MethodsRP-HPLC.ThepiefeltarraeninIAn(5μm，4.6×250mm)anddetectedat264nmand1ml/min，usingacetonitrile-0.3%phosphoricacid(34∶66)asthemobilepha

2、se.ResultsPiefeltarraeninIAinpicriafelterraeLourined.Thelinearityrangsethodissimple，accurateandainconstituientpiefeltarraeninIAinpicriafelterraeLour.【Keyination；highperformanceliquidchromatography(HPLC)苦玄参Picriafel-terraeLour.为玄参科苦玄参属唯一的一种植物，主要分布于广西、广东及云南等地。其作为广

3、西民间用药已有二百多年历史，具有清热解毒，凉血消肿之功效，用于治疗感冒风热、咽喉肿痛、痄腮、胃热腹痛、痢疾、跌打损伤、毒蛇咬伤及痈疖等［1］，因其味极苦，别名又称苦草。苦玄参是广西民间常用药，2005年版《中国药典》正文中尚未收载该品种，但有些以其为原料的中成药如妇炎净胶囊等已收载入《中国药典》（2000年版及2005年版）［2］。对苦玄参药材及其中成药中苦玄参苷IA含量的测定已有相关报道［3～6］，但均采用薄层扫描法测定，本文则采用HPLC法对不同产地、不同采收季节苦玄参中苦玄参苷IA进行含量测定，现报道如下。1仪器与试

4、药1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）：GB15B-DAD二极管阵列检测器，G1314A-Villiporesimplicity-185超纯水器（美国密理博公司）；SB3200T超声波清洗器(上海必能信有限公司)；LG16-l具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇25ml，超声处理30min，放冷，补足重量，滤过，滤液备用。取上述样品溶液1ml于微型离心管中，以10000r/min速度离心10min，取上清液备用，即得。2.2对照品溶液的制备　　精密称取苦玄参苷IA对照品适量（5.25mg），置25m

5、l量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.21mg/ml的对照品溶液。2.3色谱条件　　色谱柱为C18稳定性ODS2柱(5μm，4.6×250mm，大连依利特公司)，流动相为乙腈－0.3%磷酸(34∶66)，流速为1ml/min，检测波长为264nm，柱温为25℃，理论塔板数按苦玄参苷IA计算应不低于3000。在上述色谱条件下，供试品中苦玄参苷IA色谱峰能与其他成分分离，色谱图见图3.1～3.11。2.4线性关系考察　　分别精密吸取上述苦玄参苷IA对照品溶液(0.21mg/ml)2μl、4μl、6μl、8μ

6、l和10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积值。以峰面积为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，并求出回归方程为y=773.0x+1.85，r=0.9999。结果表明苦玄参苷IA进样量在0.42～2.10μg间呈良好线性关系，结果见表1，色谱图见图1，标准曲线见图2。a为苦玄参苷IA图1苦玄参苷IA对照品HPLC色谱图图2苦玄参苷IA标准曲线图表1苦玄参苷IA线性关系考察结果2.5精密度试验精密吸取苦玄参苷IA对照品溶液(0.21mg/ml)5μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定苦玄参苷IA峰面

7、积值，计算RSD=0.21%，结果见表2。表2精密度试验结果2.6稳定性试验　取供试品溶液（宁明），每隔4h分别进样10μl，测定苦玄参苷IA峰面积值，计算RSD=0.10%，表明供试品溶液在24h内保持稳定，结果见表3。2.7重复性试验精密称取同一产地供试品（平乐）各5份，按样品测定项下方法进行测定，结果见表4。表3稳定性试验结果表4重复性试验结果2.8加样回收率试验精密称取0.2g已测知苦玄参苷IA含量的供试品（龙州）干燥粗粉，分别精密加入一定量的苦玄参苷IA对照品溶液（0.21mg/ml）2ml，按供试品溶液制备方法

8、制备待测溶液，按上述色谱条件测定，按下式计算加样回收率，结果见表5。表5加样回收率试验结果图3.3苦玄参(040218)HPLC色谱图图3.4苦玄参(040830)HPLC色谱图图3.5苦玄参(041012)HPLC色谱图图3.6苦玄参(平乐)HPLC色谱图图3.7苦玄参(宁明)HPLC色谱图图3.8苦