hplc法测定辐花中獐牙菜苦苷的含量

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1、HPLC法测定辐花中獐牙菜苦苷的含量张秀桥,黄凤娇,陈家春,刘焱文【摘要】目的建立辐花中獐牙菜苦苷含量测定的方法。方法用高效液相色谱法,色谱柱为AlltimalC18(5μm,250mm×4.6mm),流动相为甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脱,流速1mL/min,检测波长234nm,柱温30℃。结果獐牙菜苦苷在3.10～30.98μg范围内线性关系良好,相关系数为0.9991；平均回收率为98.0%,RSD＝2.66%(n＝6)。结论该方法操作简便,分离度好,为建立其质量标准提供了实验依据。【关键词】辐

2、花；高效液相色谱法；獐牙菜苦苷；含量测定Abstract：ObjectiveToestablishamethodforcontentdeterminationofsarininLomatogoniopsisalpina.MethodsHPLCmethodfordeterminationatographiccolumn：AlltimalC18(250mm×4.6mm,5μm).Mobilephase：methanol-L/min..Columntemperture：30℃.ResultsThecalibration

3、curveofsarinpleandsensitivemethodincontrollingthequalityofLomatogoniopsisalpina.　　Keyatogoniopsisalpina；HPLC；sarin；determination辐花来源于龙胆科辐花属植物LomatogoniopsisalpinaT.N.HoetS.station色谱工作站),SartoriusBP211D分析天平。　　药材采自四川省阿坝州金川县俄热,经华中科技大学同济医学院陈家春教授鉴定为龙胆科辐花属植物Lomatog

4、oniopsisalpinaT.N.HoetS.滤膜滤过。　　2方法和结果　　2.1色谱条件及系统适应性试验色谱柱为AlltimalC18(250mm×4.6mm,5μm)。流动相为甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脱,0～25min,甲醇由20%增至50%；25～35min,甲醇由50%增至60%；流速1mL/min。检测波长234nm,柱温30℃。理论塔板数均>104,对称因子0.95～1.05。色谱图见图1。　　2.2供试品溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备　　分别精密称取对照品獐牙菜苦苷

5、一定量,混合后用甲醇超声溶解并定容,制成浓度分别为1.549mg/mL的溶液,经0.45μm滤膜滤过,滤液作为对照品溶液。　　2.2.2样品溶液的制备　　取辐花全草0.5kg,置45℃烘箱干燥至恒重,粉碎,过80目筛,混合均匀后取约0.25g,精密称定。用约8mL甲醇浸泡过夜,超声提取2次,每次30min,滤过。合并滤液,滤液水浴蒸干后用甲醇定容至10mL,经0.45μm滤膜滤过,滤液作为样品溶液。　　2.3方法学考察　　2.3.1线性关系考察试验　　取上述对照品溶液,分别进样2、4、8、10、12、16、18、

6、20μL(n＝2),以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归计算,獐牙菜苦苷回归方程为：Y＝594.29X＋127.34,r＝0.9991,进样量在3.10～30.98μg范围内线性关系良好。　　2.3.2精密度试验　　取对照品溶液,重复进样5次,每次10μL,计算峰面积,RSD＝0.93%,结果表明精密度良好。　　2.3.3重复性试验　　取同一批样品5份,按“2.2.2”项下方法制备样品溶液并测定含量,RSD＝0.48%,结果表明重复性良好。　　2.3.4稳定性试验　　取同一样品溶液,在1d内分别于0、2、4、

7、8、12h进样,计算峰面积,RSD＝0.45%,结果表明样品溶液在12h内稳定。　　2.3.5加样回收试验　　取已知含量的同一批贵州獐牙菜全草6份,精密称定,加入獐牙菜苦苷标准品适量,按“2.2.2”项下制备,计算回收率,结果见表1。表1回收率试验结果(略)　　2.4样品测定取不同产地的样品3批,按“2.2.2”项下方法制备样品溶液,以上述色谱条件测定,进样20μL,测定峰面积,计算其含量,结果见表2。表2样品含量测定结果(略)　　3讨论试验考察了甲醇回流提取和超声提取等条件下的提取率,结果提示,回流提取时獐牙菜

8、苦苷成分部分被破坏,故采用超声提取。超声提取时考察了药材粉碎度以及是否浸泡过夜的提取率,结果提示,过80目筛后用甲醇浸泡过夜,再超声提取2次,每次30min,可提取完全。