大鼠膝关节不稳定性oa模型的软骨及软骨下骨改变

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1、大鼠膝关节不稳定性OA模型的软骨及软骨下骨改变：杨勇，吴世栋，张小钰，金群华【摘要】：目的通过建立大鼠膝关节前交叉韧带切断骨性关节炎（OA）动物模型，探讨该模型中软骨及软骨下骨病理变化。方法取SD大鼠30只随机分成３组（术后2、6周和10周组）。每只大鼠右膝行前交叉韧带切断，造成膝关节不稳定动物模型，对侧为假手术侧。分别将每组动物于术后2、6和10周处死，取胫骨近段，比较各组骨关节大体形态及病理变化。光镜下观察指标有改良的Ｍankin评分、骨组织形态计量学参数。免疫组化法观察MMP-13在软骨细胞中的表达。结果在造模后2、6周和10周软骨退变呈进行性发展。Ｍanki

2、n评分增高、MMP-13表达逐渐增强，与假手术侧相比有统计学意义（P＜0.01）。软骨下骨形态计量学分析显示，造模后早期软骨下骨骨量轻度减低（P＜0.05），之后骨量逐渐增加（P＜0.01）。结论大鼠的前交叉韧带切断能够造成动物膝关节OA样改变，表现出软骨下骨吸收、骨重建的变化特点。【关键词】骨性关节炎；动物模型；软骨下骨；基质金属蛋白酶13　　Abstract：ObjectiveToestablishanosteoarthritismodelinratkneesbytransactinganteriorcruciateligament，andcharacteriz

3、ingsubchondralboneremodeling，cartilagedamageduringthediseaseprogressioninthemodelsofsurgicallyinducedOA.Methods30ratsenttransection(ACLT)，orphologicalandpathohistological，atthesametimeCoimmunostainingformatrixmetalloproteinase13(MMP-13)edtoinvestigatetheprogressionofcartilagedegradetio

4、n.ResultsThedegenerationofarticularcartilageofthesurgerykneesgote.surgerykneesMankin'sscoresandMMP-13expressionsknees(P＜0.01).Histomorphometricanalysisrevealedsubchondralbonelosserelativetoshamupto10odelhavethemeritsofeconomical，convenientandshort-terming.　　Keyalmodel;subcondralbone;ma

5、trixmetalloproteinase13　　动物模型是研究骨性关节炎（osteoarthritis，ＯＡ）病理机制、治疗及预防的重要手段之一。目前OA的动物造模方法有多种，目的是最大程度地模仿人类OA的病理生理过程。本实验通过建立大鼠膝关节不稳定OA动物模型，并观察其软骨及软骨下骨的病变特征，以期进一步了解OA的病理过程及发病机制。　　1材料与方法　　1.1主要试剂及材料　　兔抗鼠基质金属蛋白酶13（matrixmetalloproteinase13，MMP-13）单克隆抗体购自美国Santacruz公司，羊抗兔二抗EnVision购自上海基因科技有限公司。过

6、碘酸雪夫氏（PeriodicAcidSchiff）及阿辛兰(AlcianBlue，AB-PAS)染色试剂盒购自福州迈新公司。ＳＤ大鼠由宁夏医科大学实验动物中心提供。　　1.2模型制做　　取20周龄健康SD大鼠30只，雌雄不限，体重400～450g，无关节病变。将所有大鼠随机分为３组：术后２、6、10周组，每组10只。6.5%水合氯醛按100mg/kg大鼠腹腔注射麻醉，备皮。模型侧：取右膝关节内侧长约0.8cm切口，沿髌韧带内侧缘进入关节腔，找到前交叉韧带，用眼科剪剪断，生理盐水冲洗，依层缝合，术中不损伤软骨面。假手术侧：同时取对侧膝关节，入路同前，打开关节腔暴露前交

7、叉韧带，冲洗，关闭切口。大鼠术后不做任何处理，分开饲养，自由活动及进食，每日强迫大鼠活动1h。　　1.3取材及标本处理　　分别于术后2、6、10周将动物断颈处死，取膝关节上下各2cm区域的组织，去除皮肤，置于４%多聚甲醛液中，4℃下固定24h，固定后标本剔除周围软组织及韧带，PBS充分浸洗，流水冲洗2h，15%的EDTA液加微波脱钙2周，流水冲洗24h，只留胫骨部分，将其沿冠状面分为3等份。修整组织块后石蜡包埋，作冠状面不连续切片，每个标本切9张，间隔100μm。各取3张分别行HE、AB-PAS、MMP-13免疫组化染色。　　1.4大体观察　　取材时对新鲜标本的