宜昌地区结核分枝杆菌耐药状况的调查

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1、宜昌地区结核分枝杆菌耐药状况的调查李鹏刘江美谭超(宜昌市中心人民医院湖北宜昌443002)【摘要】目的分析结核分枝杆菌对一线和二线抗结核药物的耐药水平，掌握耐多药结核病流行情况。方法2010〜2013年3年内宜昌市中心医院收集的3107株临床分枝杆菌，采用绝对浓度法在改良罗氏培养基上检测其对4种一线抗结核药和5种二线抗结核药的敏感性。结果结核复合群2952株(95%),非结核分枝杆菌155株(5%)。3107株分枝杆菌对9种抗结核药的耐药率为RIF(48.50%)、INH(45.52%)、SM(

2、31.85%)、EB(19.58%)、DIP(18.56%)、LVX(16.24%)、PAS(9.78%)、AMK(7.61%)、CPM(6.29%)。与2010年的报道相比，对INH、RIF、EB、LVX、DIP的耐药率均明显增高,p<0.01;对SM、CPM的耐药率增高无显著性差异，P>0.05;而对AMK和PAS的耐药率明显降低，P<0.01o2952株结核杆菌中有耐多药结核菌(MDR2TB)和严重耐多药结核菌(XDR2TB)分别为1039和90株，分别占结核杆菌总数的3

3、5.19%和3.04%o其中MDR2TB数比2010年报道的32.02%略高。结论结核杆菌对抗结核药耐药水平较高且有增高的趋势，MDR2TB和XDR2TB流行严重，有必要加强抗结核药物耐药性的监测，并采取有效的措施控制耐药菌的传播。【关键词】结核杆菌耐药耐多药结核【中图分类号】R195【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)15-0382-02中国是全球22个结核病高负担国家之一，肺结核病人数居全球第二位。近年来，结核病的发病率和死亡率在我国27种法定传染病中均占据首位。［1］

4、由于人口基数大，流动人口增多,耐多药结核菌(MDR2TB)和严重耐多药结核菌(XDR2TB)流行以及结核菌和HIV的双重感染,使结核病疫情Id益严重。木研究回顾分宜昌地区的结核菌耐药状况，为结核病防治提供依据。1材料与方法1.1菌株2010〜2013年从临床标本中分离的抗酸分枝杆菌3107株。结核杆菌标准菌株H37RV购自中国药品生物制品检定所。1.2主要试剂硫酸链霉素（SM）粉针剂（华北制药公司）;异烟胼（INH>注射液（天津金耀氨基酸公司）;利福平（RIF）纯品（上海信谊制药厂）;盐酸乙胺丁

5、醇（EB）纯品（上海信谊制药总厂）;阿米卡星（AMK）注射液（上海信谊金朱药业公司）;卷曲霉素（CPM）粉针剂（广西南宁中科药业公司）;对氨基水杨酸钠（PAS）粉针剂（哈药集团制药总厂）;左旋氧氟沙星（LVX）注射液（扬子江药业公司）;对氨基水杨酸异烟肼（DIP）纯品（重庆华邦制药公司）。对硝基苯甲酸（PNB）（上海试剂一厂）；噻吩222羧酸酰腓（TCH,Sigma公司）。药敏试验及菌种鉴定培养基按照《结核病诊断细菌学检验规程》［2］自制。1.3含药培养基制备按规程提供配方制备改良罗氏培养基，火

6、菌前分别加入各种药物，每种药物均设高、低两个浓度、各药浓度分别为:SM10μg/ml、100μg/ml;INHlμg/ml、10μg/ml;EB5μg/ml、50μg/ml;RIF50μg/ml、250μg/ml;AMKlμg/ml、10μg/ml;PASlμg/ml、10μg/ml;CPMlμg/ml、10μg/ml;LVX2μg/ml>20μg/ml;DIPlμg/ml、10μg/ml

7、;PNB最终浓度为500μg/ml;TCH最终浓度为5μg/mL冋吋，留出一部分改良罗氏培养基用作空白对照。将各培养基分装入大试管内，每管5ml,平放在血清凝固器内90°C火菌90min,制成斜面,冷却后取出置35°C培养24h,无菌生长方可使用。1.4菌悬液制备将2〜3周菌龄的分枝杆菌用接种环小心取出,置于含0.5%Tween80的无菌试管内，用无菌玻璃棒小心研磨成乳酪状，用无菌生理盐水稀释，并与麦氏比浊管比浊，配成湿重为lmg/ml的菌悬液备用。1.5接种方法将制备好的lmg/m

8、l菌悬液作1:100倍稀释后,各吸取0.1ml分别接种于每支含药培养基的斜面上，各管接种量为10-3mg,同样接种2支不含药的改良罗氏培养基作对照。以标准菌株H37RV做培养基质控。接种完毕后，置35°C温箱内培养,4周观察结果。1.6药敏试验报告以无药对照管生长，含药高、低浓度管均不生长为敏感；含药低浓度管生长、高浓度管不生长为中度耐药;高、低浓度管均生长为高度耐药（本试验所指的耐药包括中度耐药和高度耐药），H37RV株须各药均敏感。1.7菌种鉴定报告对照管生长,PNB管、TCH管均不生长为牛