诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎t细胞转录因子的差异表达及其鉴定

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1、Anisomycin诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎T细胞转录因子的差异表达及其鉴定DifferenceexpressionandfunctionoftranscriptionfactorsinTcellofExperimentalAutoimmuneEncephalolmyelitisinducedbyanisomycin研宄生刘松导师邢飞跃教授背景：多发性硬化症(MultipleSclerosis,MS)是一种青壮年屮最常见的屮枢神经系统免疫相关性脱髄鞘疾病，因其反发作，致残率高，给个人家庭及社会带

2、来巨火负担和影响。直到目前为止，临床上对于MS的治疗尚无理想的方法，现有的治疗方法存在都存在明显的局限性，如价格昂贵，部分有效以及毒副作用等。实验性自身免疫性脑脊髓(ExperimentalAutoimmuneEncephalolmyelitis,EAE)是由初始T淋巴细胞介导，发生于易感动物，伴随有炎症发生和屮枢神经系统神经纤维髓鞘脱失的一种身免疫性疾病，是目前广泛应用的研宄人类多发性硬化症的动物模型。本研究组前期的体外研究发现，低剂fianisomycin可以抑制原代T细胞的增殖、分化等各种生物

3、学行为并显著减少多种细胞因子的分泌，因此，我们设想anisomycin有可能对小鼠的EAE疾病具有治疗或缓解作川，目前关于应川anisomycin治疗EAE的研宂报道很少，参与调控anisomycin治疗EAE的有关转录因子的研宂也未见报道。目的：利用人工合成的多肽MOG35-55作为抗原免疫C57BL/6雌性小鼠，诱导建立EAE模型。使用anisomycin体内治疗EAE小鼠，观察anisomycin的治疗效果，利用转录因子活性芯片技术筛选差异性表达的转录因子，探宄这些转录因子在anisomyci

4、n治疗过程中的功能。方法：用200PgMOG35-55同含有浓度力5mg/ml卡介苗的完全弗氏佐剂(CompleteFreund’sAdjuvant,CFA)混合形成抗原乳化产物(油包水乳剂)，并在雌性C57BL/6小鼠背部两侧多点皮下注射抗原。在免疫后的第0天和第2天，对EAE组和anisomycin组小鼠分别在腹腔注射浓度为2ng/ml的百日咳毒素(pertussistoxin,PTX),诱导建立C57BL/6小鼠的EAE模型。将小鼠随机分为三组：对照组、anisomycin治疗组和EAE组，每

5、组10只。在免疫后的访12天开始对Anisomycin组进行腹腔注射浓度力30mg/kg的anisomycin,连续注射7天；EAE组和对照组小鼠腹腔注射200Ul的PBS溶液，观察各组小鼠的临床评分。在免疫后的第18天，利用转录因子活性芯片检测小鼠淋巴细胞核蛋白屮转录因子的差异性表达；用qpcr检测mRNA水平的表达，WB检测筛选得到的各个转录因子的蛋白质水平的表达情况。结果:EAE组和anisomycin治疗组小鼠EAE的发病时间分别是免疫后的第12天和第13天,与对照组小鼠相比，EAE组和an

6、isomycin组小鼠先出现进食减少、后肢无力，尾部下垂，单肢麻痹甚至后肢完全瘫痪。在整个发病过程屮，anisomycin治疗组小鼠的临床症状和体征相对于EAE组明显减轻。整个模型小鼠在免疫后第18d临床评分达到最髙峰，anisomycin组小鼠的最高临床评分为2.0分，而EAE组小鼠的最高临床评分达到4.0分；明显高于anisomycin组小鼠。相对于于恢复期，anisomycin治疗组和EAE组小鼠在发病高峰期的临床评分明显要高。在小鼠处于恢复期时，anisomycin治疗组的最高评分为1.5,

7、而EAE组的最高临床评分为3.0。转录因子芯片筛选出Foxf2、CEBPP、USF1、NZF3、HINFP等5个差异性表达的转录因子，per，qpcr以及westernblotting的结果与芯片结果趋势相同。结论：EAE小鼠的临床评分说明本实验C57BL/6小鼠EAE模型建立成功。Anisomycin的持续治疗可以延长EAE小鼠的发病潜伏期，减短发病的进程，通过转录因子活性芯片筛选得到差异性表达的转录因子，经过qpcr与WB检测到的转录因子的变化趋势与芯片得到的结果相同，说明这些转录因子可能在EA

8、E疾病的治疗过程屮起到重要作用。其具体作用机制有待进一步研究。关键词：anisomycin；转录因子；芯八；筛选；实验性自身免疫性脑脊髓炎本课题受国家A然科学基金项目(No.81172824)资助.DifferenceexpressionandfunctionoftranscriptionfactorsinTcellofExperimentalAutoimmuneEncephalolmyelitisinducedbyanisomycinMasterCandidateL