理工大课件-常用临床病原学检测-2017

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1、常用临床病原学检测毛小琴云南省第一人民医院检验科0病原微生物鉴定微生物培养标本接种样品接收药物敏感试验工作流程微生物室工作流程简介1一、标本采集和运送2（一）微生物标本采集的一般原则：1.早期采集：采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。2.无菌采集：采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒，严格进行无菌操作；对于与外界相通的腔道，如窦道标本应由窦道底部取活组织检查，而不应从窦道口取标本，以

2、免受皮肤表面正常菌群的污染，造成混淆和误诊；对于从正常菌群寄生部位（如口腔）采集的标本，应明确检查的目的菌，在进行分离培养时，采用特殊选择性培养基。采集的标本均应盛于无菌容器内，盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，而不能用消毒剂或酸类处理。33.方法得当：即根据检测的目的菌采用适宜的方法。如，厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌，以及L型菌采用的方法不同。如尿液标本，疑为厌氧菌感染时，应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取；若怀疑是需氧或兼性厌氧菌的感染。则可通过自然导尿获

3、取标本。4.标本适量：采集量不应过少或过多，而且要有代表性，同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。如肠热症患者，发病的第1周应采集血液，第2周应采集粪便和尿液。否则影响细菌检出率。5.安全采集：采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也要注意安全，防止传播和自身感染。4（二）微生物标本运送的一般原则：1.及时送检！----标本采集后应立即送至微生物学实验室。----标本采集后在室温下超过2h未送达实验室者可视为不合格标本。2.标识无误！----送检标本必须与检验申请单有相同的

4、唯一标识，而且送检标本应注明标本来源和检验目的。3.正确运送！如：棉拭子宜用运送培养基；可能混有正常菌群的标本不能用肉汤培养基运送；血培养瓶室温运送；尿液标本不能及时送检时，可4℃冷藏，但若用于淋病奈瑟菌培养时则需室温保存和运送；胸腹水等无菌体液可用无菌小瓶送检，也可直接注入血培养瓶中送检，等等。当标本不能及时送检时，应使用运送培养基。4.安全运送！----标本在运送过程中保证无渗漏、无污染等。5（一）直接显微镜检测法（即形态学检查）----涂片染色法：常用的有革兰染色、抗酸染色，主要用于直接观察细菌

5、形态、染色性状或观察宿主细胞内包涵体的特征等。----悬滴法或压片法：需借助暗视野显微镜或相关显微镜，主要用于观察病原体的生长、运动方式、螺旋体的形态或动动。2.病原体特异性抗原检测----用已知抗体，借且免疫荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验、对流免疫电泳等技术检测标本中未知的病原体抗原。二、微生物检查方法形态学检查革兰氏染色6（三）病原体的分离培养和鉴定微生物培养分类血培养自动培养细菌培养真菌培养7细菌鉴定形态学检查生物化学检查法免疫学检查法分子生物学检查法生物学检查法8细菌鉴定菌

6、落大小菌落颜色溶血特点产色素情况气味革兰染色镜检真菌湿片镜检抗酸染色镜检墨汁染色G-菌：氧化酶、OF葡萄球菌属：触酶、凝固酶b溶血链球菌：血清凝集试验肠球菌属：高盐、胆七试验形态学菌落特征生化鉴定9101.形态学检查一、观察细菌的培养特征来判断，观察内容包括：细菌培养物的颜色、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基中的生长状态；二、显微镜检查：借助各种显微镜可对细菌形态、基本结构、排列方式、数量、活体状态、运动特征等进行直观检查，对样本中细菌的含量和种类做出大致判断。2.生物化学

7、检查法生物化学法又叫生化反应试验，它是利用各种不同细菌在进化中形成的独特的酶系统，在其生长环境中加入相应作用底物和指示剂，经培养一定时间后，细菌的代谢产物呈现肉眼可见或仪器可分析的变化，根据这些变化可对细菌的种类进行鉴别。糖代谢试验；蛋白质代谢试验；碳源和氮源利用试验；氧化酶、接触酶等单项检测试验。11对于工作经验很丰富的检验人员，双歧法也不失为一种简便而有效的细菌鉴定方法，这个方法所选用的测试特异性很好。测试1测试2（1）双歧法：工作量大、工作效率低、准确性差、人为因素。12（2）数值法：将细菌的形

8、态和理化特征用数字表示，按照数学理论的方法将反应谱进行数字处理最后得出结果。数值鉴定的流程分离平板鉴定结果孵育调配菌液测试组合分离平板鉴定结果孵育调配菌液测试组合分离平板鉴定结果孵育调配菌液测试组合1314结果判读查询编码册或软件1516免疫学检查又叫血清学检查，它是利用抗体-抗原反应在细菌感染的种类、性质、部位及病人的感染程度进行特异性诊断，包括：沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体相混合，在一定条件下，形成肉眼可见的沉淀物。应用于如链球菌、肺炎链球菌、鼠疫