丙酸钙对大蒜根尖微核效应的细胞遗传学研究_图文

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1、丙酸钙对大蒜根尖微核效应的细胞遗传学研究摘要：以人蒜为实验材料.研究不同浓度丙酸钙对人蒜根尖的细胞遗传学效应。结果表明，丙酸钙浓度达到一定范围时能诱发一定的微核千分率，11丙酸钙浓度越髙，微核率越大。因我们实验用的内酸钙溶液浓度已远远超过用作食品添加剂的最大允许剂屋,可以认为只要控制好用量，丙酸钙可作为健康无害的添加剂。关键词：丙酸钙大蒜微核千分率正文：丙酸钙是一种无臭或具轻微特臭的片色结晶性粉末防腐剂，可溶于水（lg约溶于3mL水）。大蒜为百合科植物，药用其鳞茎，具冇解毒、抗菌杀菌、增强免疫力、抗肿瘤等作用。业已探明许多食品添加剂对高等动物和植物具有明显的诱变效应，但至今尚未

2、见关于丙酸钙対大蒜根尖的细胞遗传学微核效应研究的报道。我们组以丙酸钙为诱变剂.以人蒜根尖细胞微核T分率为指标，研究丙酸钙对大蒜根尖的细胞遗传学毒性效应。一、实验目的1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点。2、学习植物根尖细胞的微核检测技术。3、研究丙酸钙对人蒜根尖微核效应。二、实验原理微核（micronuclei）简称MCN,是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。微核形成:有丝分裂示期丧失着丝粒的染色体断片

3、不能向两极移动，游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，在核产生一到儿个很小的圆形结构一微核，直径大约是细胞直径的1/20〜1/5。微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正和关，因此，微核是常用的遗传毒理学指标0—，指示染色体或纺僦体的损伤。微核测试已用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。三、实验材料大蒜由老师提供，购口商场。内酸钙由河南亿特化工产品有限公司厂生产，购口老师推荐的食品添加剂商店。四、实验仪器设备及药品显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、银子、培养皿、载玻片及盖玻片等。盐酸、70%乙醇、卡诺固定液、丙酸钙溶液等。五、实验步

4、骤1.取材大蒜：剥皮，于24°C水屮浸泡24-36h,选择根长整齐一致，不定根长约0.5-lcm左右的大蒜随机分组。2.处理各实验组组別处理方法处理时间/h根尖数/根微核千分率/%。1蒸憾水（阴性对照）243250mmol/L叠氮化钠(阳性对照)24330.0025g/ml丙酸钙24340.005g/ml丙酸钙24350.01g/ml丙酸钙24360.02g/ml丙酸钙243为避免偶然性，我们设置了重复实验，每组重复一次。3、放在清水中恢复培养24小时。4、卡诺固定液中固定24小时，移至70%乙醇中4°C下保存。5、制片①根尖用lmol/L的盐酸处理lOmin,水洗3次。②切取

5、近根尖分生区的伸长区组织，用改良苯酚品红染色10mine③压片：加上盖玻片后，用解剖针针柄轻敲使细胞分散，最后垂直压下去。6、镜检每一处理观察3个根尖，每个根尖计数200-500个细胞，统计其中含的细胞数，计算平均数，即为该处理的微核T分率。六、实验结果1、微核形成与识别：首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察，找到微核。(1)在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。(2)小核着色与主核相当或稍浅。(3)小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。2、实验图片及结果•005g/ml丙酸钙0.01g/ml丙酸钙0.02g/ml丙酸钙组别处理方法123

6、微核千分率/%0细胞总数微核数细胞总数微核数细胞总数微核数1蒸馄水3120323030900250mmol/L叠氮化钠24911423203191546.430.0025g/ml丙酸钙300035604070040.005g/ml丙酸钙2970331040310.9750.01g/ml内酸钙3501288144323.7060.02g/ml丙酸钙2231453239724.66人们常用微核率来反映坏境中有害物毒物的污染程度：一般认为，微核率在10%。以F时无污染，为环境木底；lO%o-18%o吋，有轻度污染；18%o-3O%o时，有中度污染；＞30%。时，有重度污染。由实验结果

7、可知:微核千分率/%。污染程度蒸僻水0无污染50mmol/L叠氮化钠46.4无污染0.0025g/ml丙酸钙0无污染0.005g/ml丙酸钙0.97无污染0.01g/ml丙酸钙3.70无污染0.02g/ml丙酸钙4.66无污染可以认为只要控制丙酸钙用屋在安全范围内，丙酸钙是一种安全无害的食品添加剂。七、分析讨论1、用清水将大蒜发根时，大蒜要直立于清水中，使根直立生长。2、若测得的诱变剂的微核过多，可适当稀释诱变剂，再进行微核检测。3、切根时，要切1mm左右，避免过多，否则所做的装片中伸长区细