红细胞渗透脆性实验

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1、红细胞渗透脆性实验Measuringforerythrocyteosmoticfragility【教学对象与学时】一、教学对象：五年制本科二、学时：4学时【预习要求】预习红细胞生理特性【目的要求】一、操作：学习用试管法测定红细胞渗透脆性二、理论：1.了解红细胞渗透脆性实验的原理。2.观察红细胞对不同渗透张力的细胞外溶液的抵抗力，进一步理解细胞外液渗透张力对维持红细胞正常形态与功能的重要性。【重点和难点】一、重点1.准确配制不同渗透张力的溶液，掌握正确的红细胞渗透脆性测量方法。2.理解红细胞渗透脆性实验的原理。二、难点1.准确配制不同渗透张力的溶液

2、。2.掌握正确的红细胞渗透脆性测量方法。【教学过程设计】1.课前提问和预习检查。2.讲解红细胞渗透脆性实验的原理。3.介绍不同渗透张力溶液的配制法和抗凝血液的制备。4.学生分组进行实验，观察红细胞对蒸馏水、1.9%尿素溶液和不同浓度的NaCl溶液的抵抗力。5.实验结束前汇总全班实验结果，讨论实验结果，理解实验结果出现的原因。【课前预习检查或提问】一、何谓红细胞渗透脆性？其正常值是多少？二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？【课前讲解】一、实验设计的原理将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形(

3、图1A)变成球形（图1B），并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。生理学上将渗透压与

4、血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85%的NaCl溶液既是等渗溶液又是等张溶液。AB图1.红细胞形态(A:正常；B：低渗NaCl溶液中球形红细胞).二、实验方法1.制备不同浓度的NaCl溶液。先配制1%浓度的低渗NaCl溶液100ml，然后取口径相同的干净小试管12支，编号排列在试管架上，按下表分别向各试管内加入1%NaCl溶液和蒸馏水后混匀，配制成12种0.68%~0

5、.24%不同浓度的低渗NaCl溶液(图2)图2用于配制低渗NaCl溶液的试管表1红细胞渗透脆性实验中不同浓度的NaCl溶液配制法试管编号1234567891011121%NaCl溶液（ml）1.71.61.51.41.31.21.11.00.90.80.70.6蒸馏水（(ml)0.80.91.01.11.21.31.41.51.61.71.81.9NaCl溶液浓度（%）0.680.640.600.560.520.480.440.400.360.320.280.241.分别配制0.85%浓度的NaCl溶液、1.9%浓度的尿素溶液。另取3支小试管，编

6、号13~15，分别盛2.5ml0.85%NaCl溶液、1.9%尿素溶液和蒸馏水。2.碘酒、酒精消毒皮肤后用灭菌干燥的、肝素湿润的注射器从肘正中静脉取血2ml（图3），立即混匀，将其中1ml加入试管，余血依次向15支试管内各加入1滴（图4），轻轻混匀。肘正中静脉图3.上臂大静脉图4.向试管内加血示意图3.观察13、14、15管的变化，其余12管在室温下静置1小时，然后观察混合液的颜色和透明度。1）试管内液体完全变成透明红色，说明红细胞全部破裂，称完全溶血（图5A）。2）试管内液体下层为混浊红色，上层为透明红色，表示部分红细胞破裂，称不完全溶血（图5

7、B）。3）试管内下层为混浊红色，上层无色透明，说明红细胞全部没有破坏（图5C）。CBA图5.溶血程度示意图1.记录实验结果。包括受试者姓名和红细胞渗透脆性范围（即最小抵抗力的NaCl溶液浓度和最大抵抗力的NaCl溶液浓度）以及13~15管的结果。2.取第6管和第13管混合液各1滴于载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下观察红细胞形态。图6.等渗NaCl溶液中红细胞形态成败关键（注意事项）1.血液最好新鲜制备。2.准确配制不同浓度的低渗盐溶液。3.所有玻璃器皿要求干燥清洁。4.向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。混匀含红细胞的液体时动作

8、应轻，以免造成溶血。5.观察溶血情况时以白色为背景。6.为使各管加血量相同，加血时持针角度应一致。7.各试管应准确编号。8.玻璃器皿应小