四氢噁嗪类和吡咯酮并吡唑类p53-mdm2小分子抑制剂的设计、合成及生物活性评价

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1、万方数据!叁嗯嗪类和吡咯酮并吡唑类p53．MDM2小分子抑制剂的设计．合成及生物活性评价MDM2HDM2DⅣ匝DMSODⅣL廿TEAHBTUDL如THFcAN但PDEmCPBAIC50H久丌7缩略词表鼠双微体基因2人双微体基因2ⅣⅣ-二甲基甲酰胺二甲亚砜4．二甲氨基吡啶三乙胺苯并三氮唑“MⅣⅣ-四甲基脲六氟磷酸盐偶氮二甲酸二异丙酯四氢呋喃环鸟苷酸磷酸二酯酶间氯过氧苯甲酸半数抑制浓度2-(7．偶氮苯并三氮唑)“NⅣ：Ⅳ，-四甲基脲六氟磷酸酯．5．万方数据第二军医大学硕士学位论文-二l厶--J-一刖舌p53蛋白被喻为“基因组的保护者”，是细胞内重要的肿瘤抑制因子

2、之一。在DNA损伤、缺氧等压力情况下，p53蛋白可激活信号传导通路，参与DNA修复、细胞周期生长阻滞和细胞凋亡调节，从而消除癌变的细胞。研究表明约有50％以上的肿瘤患者存在着p53蛋白缺失、突变或p53功能丧失。裸鼠模型试验发现敲除p53基因的裸鼠能正常生长，但易导致肿瘤发生。另外，50％的肿瘤患者虽存在野生型p53基因，但多种因素会使p53丧失正常功能，其中一个主要的抑制机制是鼠双微体MDM2(人体中称为皿M2)蛋白的过度表达。正常细胞中，p53蛋白和MDM2蛋白通过一个负反馈调节通路来维持二者的精细平衡。p53蛋白可以促进MDM2蛋白的表达，MDM2蛋白

3、反过来调节p53的水平，主要调节方式有：(1)MDM2蛋白直接与p53蛋白N端的转录激活区域结合，阻断p53蛋白与相关DNA的结合，使其失去转录活性：(2)MDM2蛋白可促进p53蛋白从细胞核转运到细胞质中：(3)MDM2蛋白作为E3泛素连接酶，能够使p53蛋白通过泛素化降解。肿瘤细胞中MDM2蛋白的过度表达，使得p53蛋白在细胞中的浓度降低，使p53失去肿瘤抑制作用。阻断p53蛋白与MDM2蛋白的相互作用，可以使p53的功能恢复，抑制肿瘤的发生。因此，利用小分子抑制剂阻断p53．MDM2的直接结合成为肿瘤治疗的有效策略。迄今为止，p53．MDM2小分子抑制

4、剂的研究取得较大进展，已有8个小分子抑制剂进入临床I期试验，分别是：RG7112、RG7388、MI．77301、AMG232、MK．8242、CGM097、DS．3032b、R06839921。临床试验数据表明该类抑制剂具有很好的新药研发前景。本课题组通过对6个上市药物中的蛋白结合抑制活性和体外抗肿瘤活性筛选，发现一个具有抑制p53．MDM2结合活性的药物，将其作为先导化合物进行结构修饰和改造，获得一类全新结构的p53．MDM2小分子抑制剂。另外，课题组前期通过合理药物设计方法，获得一类具有p53．MDM2和NF．r．B信号通路双重抑制作用的具有优秀的抗肿

5、瘤活性吡咯酮并吡唑类化合物。我们期望通过进一步优化设计和构效关系探讨，从中筛选获得活性更优的化合物。．6．万方数据四氢噫嗪类和吡咯酮并吡唑类p53．MDM2小分子抑制剂的设计、合成及生物活性评价第一章p53一MDM2小分子抑制剂研究进展一、p53与MDM2的负反馈调节通路p53蛋白在肿瘤的恶性转化过程中起着关键的抑制作用，被喻为“基因组的保护者”【1]。应激条件下，例如DNA损伤、缺氧、癌基因激活时，p53蛋白可以将压力信号转为细胞生长抑制信号，介导DNA修复，调节细胞周期，促进细胞凋亡[2-41。另外，p53蛋白还参与肿瘤进程相关的细胞衰老和新陈代谢调制5

6、。¨。通过这些途径，p53蛋白可以消除潜在癌变的细胞。p53蛋白在外界信号刺激下激活，但需要避免p53蛋白过度激活，否则p53的浓度不能处于精密平衡，会给机体带来严重损害，这种平衡主要依赖p53蛋白的主要负调节因子MDM2(人体内称HDM2)的调节。p53蛋白可以促使MDM2蛋白的表达，而MDM2蛋白反过来抑制p53蛋白的活性。p53蛋白浓度降低又可以减少MDM2蛋白的表达，使MDM2蛋白对p53蛋白的抑制减少，从而形成维持p53蛋白正常功能的最重要负反馈调节通路。MDM2蛋白和p53蛋白的活性区域结合，使其激活和抑制转录的功能抑制，主要通过以下三种方式实现

7、：(1)MDM2蛋白直接与p53蛋白N端的转录激活区域结合，阻断p53蛋白与相关DNA的结合，使其失去转录活性；(2)MDM2蛋白可促进p53蛋白从细胞核转运到细胞质中；(3)MDM2蛋白作为E3泛素连接酶，能够使p53蛋白通过泛素化降解，其中最主要的途径是作为泛素连接酶使p53降解【2，8。11】。LJ矽—一!三；。，7，、／W"VW⋯RNA∽o',hu．rIc】’gt‘l‘图1．1p53与MDM2负反馈调节通路嗍许多人类肿瘤中都存在着p53蛋白的失活或者其介导的通路受到阻断的现象。研究表明，大约有50％的肿瘤患者中存在着p53基因的缺失或突变现象，使得p

8、53蛋白失去肿瘤抑制的功能‘7，10,11l。另外，