牛磺酸对oxldl诱导的mc细胞lox1表达的影响

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1、牛磺酸对oxLDL诱导的MC细胞Lox1表达的影响【摘要】目的观察牛磺酸对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的大鼠系膜细胞（MC）血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(Lox1)的表达。方法培养大鼠MC细胞，分为空白对照组、oxLDL组、牛磺酸组和牛磺酸+oxLDL组，24h后以RTPCR检测Lox1mRNA表达情况,并用分光光度比色法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果MC细胞中有Lox1表达，oxLDL诱导后表达增加，并导致MC细胞SOD活性下降、MDA含量明显高于对照

2、组［分别为SOD（19950±0079）×103U/L，MDA（1250±0002）μmol/L,P＜005］。牛磺酸可明显降低oxLDL诱导引起Lox1表达水平,同时也使SOD活性增加和MDA含量降低,P＜005。结论牛磺酸可能通过抑制oxLDL受体Lox1的表达及由其引起的氧化应激减轻oxLDL对肾脏的损伤。【关键词】牛磺酸；氧化低密度脂蛋白；系膜细胞　　【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectontheexpressionoflectinlikeoxidized

3、LDLreceptor(LOX)1inducedbyoxLDLandtheantioxidationoftaurineinratmesangialcells(MC).MethodsFourgroupsinedontheexpressionofLox1mRNAbyRTPCR,theactivityofSODandconcentrationofMDAinsupernatefluidinedbychromatometry.ResultsMCdidhaveLox1andtheexpressionetimetheacti

4、vationofSODdamageprobablybyinhibitingtheexpressionofLox1andoxidativestressinducedbyoxLDL.　　【Keyesangialcell　　　　牛磺酸(taurine)即2氨基乙磺酸，是体内分布广泛、效应多样的自调素，它不但参与维持机体内环境稳定，而且对多种组织细胞有明显保护作用［１，２］。但其对肾脏系膜细胞是否有直接保护作用，国内外研究报道尚少。有研究表明，氧化低密度脂蛋白(oxidizedloa公司；oxLDL购自中国协和医科大学基

5、础生化所；SOD、MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所；低糖DMEM购自Gibsco公司；胎牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品；RNA抽提试剂盒购自Promega公司；RTPCR试剂盒购自宝生生物工程大连有限公司；7225型紫外分光光度计为上海精密科学仪器有限公司生产；图像扫描仪为Fujifilm公司ImageMasterVDS产品。　　1．2细胞系大鼠系膜细胞购自杭州市中医院肾病中心。细胞系用含10％胎牛血清的低糖DMEM培养。　　1．3方法　　1．3．1细胞培养及分组：大鼠系膜细胞在含10％胎牛血清及HE

6、PES的低糖DMEM培养液中贴壁生长。以每孔5×104个细胞总数接种到24孔培养板，待细胞达到80％左右，更换无血清培养基使细胞同步生长，将培养细胞随机分为4组：①正常对照组，只加无血清培养液；②oxLDL组，无血清培养液加oxLDL，浓度为50mg/L；③牛磺酸组，无血清培养液加牛磺酸，浓度为20mmol/L；④牛磺酸+oxLDL组，无血清培养液中含终浓度为20mmol/L牛磺酸和50mg/LoxLDL。每组设6个复孔，用药后继续培养24h，收集细胞上清液和细胞待检。　　1．3．2RTPCR检测细胞Lox1

7、mRNA表达：以Trizol试剂抽提细胞的总RNA，使用逆转录试剂盒，以oligoDT为引物，取总RNA2μg进行逆转录反应，之后以50μl反应体系进行体外PCR扩增，以βactin作为内参。Lox1引物序列为：正义5’GACTGGATCTGGCATAAAGA3’，反义5’CCTTCTTCTTCTGACATATGCTG3’，扩增产物大小为328bp；βactin引物序列为：正义5’TTCCAGCCTTCCTTCCTGG3’，反义5’TTGCGCTCAGGAGGAGCAAT3’，扩增产物大小为206b

8、p，引物均由上海生物工程公司合成。反应条件：预变性94℃1min；然后进入94℃变性30s；55℃退火45s；72℃延伸1min，共35个循环；反应结束前72℃10min以充分延伸。PCR产物于15％琼脂糖凝胶中电泳，凝胶成像系统拍照并进行半定量分析，βactin值校正，得出目的条带与内参照条带的光密度比值。