银屑病病人外周血单核细胞tlr2基因表达及血清a

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1、银屑病病人外周血单核细胞TLR2基因表达及血清A【摘要】目的观察寻常型银屑病病人外周血单核细胞Toll样受体2（TLR2）mRNA表达及血清抗链球菌溶血素“O”（ASO）和白细胞介素8（IL8）水平的变化,探讨其与银屑病发病的关系。方法采用RTPCR方法检测银屑病病人(银屑病组)外周血单核细胞TLR2mRNA表达,采用胶乳凝集法检测血清ASO水平,采用ELISA法检测血清IL8水平。以我院体检健康者30例作为对照(正常对照组)。结果银屑病组TLR2mRNA表达明显高于正常对照组（t=5.541,P＜0.01）；银屑病组点滴

2、型与斑块型TLR2mRNA表达比较无显著性差异（t=0.318,P＞0.05）。银屑病组血清ASO水平明显高于正常对照组（χ2=8.604,P＜0.01）；且点滴型病人明显高于斑块型病人（χ2=9.780,P＜0.01）。银屑病组血清IL8水平显著高于正常对照组（t=28.463,P＜0.01）；点滴型与斑块型病人之间比较无显著性差异（t=0.660,P＞0.05）。点滴型病人ASO阳性者TLR2mRNA表达水平高于ASO阴性者,差异有显著性（t=2.407,P＜0.05）；银屑病病人外周血TLR2mRNA表达与IL8水平呈正

3、相关（r=0.637,P＜0.01）。结论TLR2可能通过识别链球菌等入侵病原微生物启动机体免疫应答,介导细胞因子IL8等的产生,参与银屑病皮损的发生和发展。【关键词】银屑病Toll样受体2抗链球菌溶血素白细胞介素8［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheexpressionoftolllikereceptor2(TLR2)mRNAinmonocytesofpsoriaticpatients’bloodandtheserumlevelsofinterleukin8(IL8)andantist

4、reptolysinO(ASO),andtoexploretheirrelevancetopathogenesisofpsoriasis.MethodsExpressionofTLR2mRNAerasechainreaction(RTPCR)method;serumlevelsofASOandIL8elinkedimmunosorbentassay(ELISA)respectively.ResultsExpressionofTLR2mRNAofthepatientsRNAbetRNAinpsoriaticpatientsRNA

5、andIL8inpsoriaticpatientshadapositivecorrelation(r=0.637,P＜0.01).ConclusionTLR2maybeinvolvedintheoccurenceanddevelopmentofpsoriasisbyrecognizingtheinvadingstreptosisandthefolloL，其中2mL枸橼酸钠抗凝，用于TLR2mRNA的检测；其余3mL置试管中，待血块收缩后以2500r/min离心分离血清，分装后置-20℃冰箱保存，分别用于ASO、IL8水平检测。

6、1.3TLR2mRNA表达检测以小量血液总RNA抽提试剂盒（上海华舜生物工程有限公司）提取外周血中总RNA，紫外分光光度计（DU640,美国Beckman公司）测定其纯度和含量，取RNA样本2μg采用一步法RTPCR检测TLR2mRNA表达，以β肌动蛋白（βactin）为内参照。引物（上海生工生物工程技术服务公司合成）序列为：TLR2正义：3′GCCAAAGTCTTGATTGATTGG5′，反义：3′TTGAAGTTCTCCAGCTCCTG5′，产物长度为347bp；βactin正义：3′ACGTCTGC

7、TGGAAGGTGGAC5′，反义：3′GGTACCACCATGTACCCAGG5′，产物长度为168bp。1.4扩增产物检测PCR扩增完毕后，每个反应体系取产物2μL，于20g/L琼脂糖凝胶中进行电泳，在紫外线透射凝胶成像仪（VilberLourmat，France）中分析电泳带的灰度值，以TLR2/βactin记录结果，作为TLR2mRNA的相对表达水平。1.5ASO检测采用胶乳凝集法（试剂为北京利德曼生化有限公司生产的ASO胶乳试剂），以ASO＞2×105kU/L为阳性。1.6血清IL8水平测定采用双抗体夹心E

8、LISA法（试剂盒为BiosourceELISAkit，北京中昊时代生物技术分装）。具体操作严格按试剂盒说明书进行，即刻测量标本在492nm波长处吸光度值，并根据标准曲线查出其浓度。2结果银屑病组TLR2mRNA的表达水平显著高于正常对照组，差异有