基于qpcr技术定量分析益生菌制剂对肠道菌群的影响

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1、１００类号：学校代码：６９１２０１５０１８８密级：：学号ＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＯＭＭＥＲＣＥ硕士学位论文基于ｑＰＣＲ技术定量分析益生菌制剂对肠道菌群的影响ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥｆｆｅｃｔｓｏｆＰｒｏｂｉｏｔｉｃｓｏｎＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＦｌｏｒａＢａｓｅｄｏｎＰＣＲＴｅｃｈｎｉｕｅｑｑ研究生：王泳专业名称：发酵工程＇指导教师：陈庆森教授２０１８年５月分类号：学校代码：10069密级：学号：120150188基于qPCR技术定

2、量分析益生菌制剂对肠道菌群的影响QuantitativeAnalysisofEffectsofProbioticsonIntestinalFloraBasedonqPCRTechnique研究生姓名：王泳专业名称：发酵工程指导教师姓名：陈庆森教授论文提交日期：2018年5月学位授予单位：天津商业大学独创性声明及使用授权声明一、学位论文独创性声明本人所撰写的学位论文是在指导教师的指导下独立完成的研宄成果。除己明确标注或得到许可外，所撰写的学位论文中不包含他人己申请学位或其他用途所使用过的成果，不包含其他个人或集体已经发表或撰写

3、过的研宄成果，本人的指导教师对此进行了审定。对本文的研宄做出重要贡献的个人或集体，本人己在文中做出明。确的说明并表示谢意，本人承担相应责任如有不实。二、学位论文及研宄成果使用授权声明本人同意授权天津商业大学以非贏利方式保存、使用本人的学位论文的电子版及纸质版６授权天津商业大学将本论文的全部内容或部分内容提供给有关方面编入数据库进行检索、出版及提供信息服务。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。本人在校期间取得的研究数据、相关成果等知识产权归天津商业大学所有。注：涉及保密的学位论文在解密后适用

4、本授权。学位论文作者签字：指导教师签字：丨曰期？６月－２〇托年日Ｉ摘要宿主健康与肠道菌群息息相关，一旦肠道菌群结构发生失调，各种相关联的疾病便随之发生。因此，获取肠道菌群的结构信息以及消长规律至关重要，特别是弄清晰与肠道健康密切相关的关键菌种（群）的变化，对阐述肠道疾病发生发展意义更加重要。众多的研究表明，高质量的基因组DNA是保障肠道菌群研究顺利开展的关键，也为进一步的分子生物学以及生物信息学的研究奠定了基础。益生菌制剂具有通过调节肠道菌群来改善机体健康的能力，是当今研究的热门领域。本研究首先以嗜酸乳杆菌（Lactob

5、acillusacidophilus）和人体粪便为材料，采用球磨-十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammoniumbromide，CTAB）法探讨并确定获取细菌基因组DNA高得率和高质量的条件；随后应用实时荧光定量PCR技术，从肠道菌群变化着手，定量分析纯菌粉、水苏糖和MF13干预下腹泻、便秘和健康受试者肠道特定菌种（群）的变化规律，以便明确这些关键菌属对维护和改善肠道健康的科学价值。DNA提取结果显示，研磨珠直径为0.1mm条件下利用Mini-BeadBeater-16击打3.5分钟即可获得高质量粪便菌群DNA。本研究对

6、16名志愿者肠道菌群中的双歧杆菌（Bifidobacteriumspp.）、拟杆菌（Bacteroides）、乳杆菌（Lactobacillusspp.）和普拉梭菌（Faecalibacteriurnprausnitzi）进行定量分析。纯菌粉干预腹泻人群肠道中乳杆菌量在短时间内大幅度增加，从干预前5.2±0.97到干预三周增长至6.36±0.40，普拉梭菌干预期间也一直处于持续增长水平，由干预前11.32±1.61到干预三周增至13.51±1.26，双歧杆菌、拟杆菌只有小幅度的变化；健康组肠道内普拉梭菌的量呈下降趋势，干预前为12.99±0

7、.75至干预停止降为8.19±1.65，双歧杆菌、乳杆菌和拟杆菌无明显变化。水苏糖干预下，腹泻和便秘组中双歧杆菌、乳杆菌量随干预时间延长一直呈增长趋势，不断向健康组水平靠近，拟杆菌在三组受试者中都无明显变化，还发现水苏糖对腹泻受试者肠道内普拉梭菌有促进作用，干预前为11.33±0.89到干预停止增长至13±0.65，却抑制便秘和健康受试者肠道内普拉梭菌的生长。MF13干预下，腹泻和便秘组中乳杆菌、双歧杆菌和普拉梭菌的量都随干预时间增加呈持续增长趋势，腹泻组的拟杆菌量却由干预前的15.9±0.15到干预第五周降低至14.55±0.68，便秘组

8、与其相反呈增长趋势，由干预前14.69±0.41到第五周增长至15.12±0.48，但干预终止后腹泻和便秘组拟杆菌、乳杆菌和普拉梭菌的量均接近健康水平；三个受试组人群肠道内双歧杆