中药黄芪对球囊损伤大鼠颈总动脉后增殖细胞核抗原及

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1、中药黄芪对球囊损伤大鼠颈总动脉后增殖细胞核抗原及【关键词】黄芪；,,球囊损伤；,,大鼠；,,增殖细胞核抗原；,,细胞周期蛋白依赖性激酶；,,免疫组织化学方法　　摘要：目的：观察黄芪对球囊损伤大鼠颈总动脉内皮后对其细胞核增殖抗原（PA）及细胞周期蛋白依赖性激酶（cdks,cdk2，cdk4）表达的影响，探讨其可能机制。方法：随机将36只雄性SD大鼠分为对照组、手术组及黄芪组，球囊损伤大鼠颈总动脉前1天始给对照组和手术组0.8ml/100g/d生理盐水灌胃，黄芪组给予相同剂量的中药灌胃，连续至第5天和28天两个时间点处死大鼠，取其损

2、伤的颈总动脉，应用组织学检查术后5天和28天的内膜增生情况和免疫组织化学方法检测5天时PA、CDK2、CDK4蛋白的表达。结果：球囊损伤颈总动脉术后5天时，血管内膜及内膜面积轻度增生，无统计学意义；28天时，手术组内膜增生明显，用中药黄芪后增生减少，与手术组比较差异有显著性(P<0.05)，用黄芪后内膜增生面积减少，与手术组比较差异有显著性(P<0.05)。用免疫组织化学方法测术后5天各组PA、CDK2、CDK4蛋白阳性细胞的表达，手术组表达最强，用药后各组表达量均显著减少(P<0.01)。结论：中药黄芪对球囊

3、损伤后动脉血管内膜增生有抑制作用，其机制可能与下调细胞核增殖抗原及细胞周期蛋白依赖激酶的表达，从而抑制血管内膜平滑肌细胞的增殖有关。　　关键词：黄芪；球囊损伤；大鼠；增殖细胞核抗原；细胞周期蛋白依赖性激酶；免疫组织化学方法　　经皮腔内冠状动脉成形术（percutaneousstransluminalcoronaryangioplasty，PTCA）已经成为冠心病治疗的主要选择，但术后再狭窄率高，是PTCA远期疗效的主要限制因素［1］。其主要机制是血管平滑肌细胞增殖及迁移，细胞外基质合成，血小板大量聚集，局部血栓形成，早期的血管回

4、缩和晚期的血管重构［2］，其中血管平滑肌的增殖和迁移最为重要［3］。中医认为本病属于血淤症的范畴，基本病机是本虚标实、气虚血瘀，故治疗以益气活血为主。本研究应用球囊损伤大鼠颈总动脉内皮复制动脉狭窄的模型，给予中药黄芪治疗，观察其对大鼠颈总动脉血管内膜增生过程以及对PA、CDK2、CDK4蛋白表达的影响，探讨中药黄芪防治冠脉内血管成形术后再狭窄的可能机制。　　1材料和方法　　11实验动物　　雄性SD大鼠36只，清洁级，体重350~450g，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。　　12实验药物　　中药黄芪由黄芪50g加适量水煎煮

5、两次，高温消毒，药液浓缩后制成浓度为0.5g/ml的汤药。　　13实验方法　　131动物造模动物随机分为对照组、手术组及黄芪组,每组两个时相点（5天和28天），每个时相点6只动物。造模：3%戊巴比妥钠腹腔麻醉，由右侧股动脉插入2F球囊导管，沿股动脉、髂动脉、腹主动脉、主动脉弓至左侧颈内外动脉分叉处以颈部暴露切口确认颈总动脉，球囊充盈生理盐水（0.2ml）后导管移行约1.5cm造成颈动脉过度扩张损伤，负压回抽生理盐水，然后再送入导管，反复抽拉3次，以使内膜剥脱，术后连续3天肌注青霉素预防感染。造模前一天，黄芪组开始灌胃给药，0.8

6、ml/100g/d,连续治疗5天到28天时处死，手术组及对照组给予等量生理盐水灌胃。　　132形态学观察各时间点处死大鼠后，取出球囊损伤的左颈总动脉约1.0cm，4%中性多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察血管内膜增生情况，并用图像分析仪（HMIAS2000型全自动彩色图像分析系统）测定内膜增生厚度及面积。　　133免疫组织化学法将损伤的大鼠颈总动脉石蜡包埋，常规切片,厚度为2μm，对5天时相点的各组进行PA、CDK2、CDK4蛋白的免疫组织化学检测，SP法，DABH2O2显色，苏木素复染，胞核呈棕黄，黄色为

7、阳性。PA、CDK2、CDK4抗体及SP试剂盒、DAB显色试剂盒均为美国SantaCruze公司产品，购自北京中杉金桥公司。每例动物每个指标观察3张切片，每张切片随机取5个不重叠的高倍镜视野（×400倍），显微镜下记取每张切片阳性细胞的百分率，取其均数，作为阳性表达指数来表示蛋白质的表达水平。　　14统计学分析　　数据统计采用SPSS12.0软件包，各组数据用x±s表示，各组间比较用方差分析，两组间比较用t检验。　　2结果　　21形态学观察　　球囊损伤术后5天，对照组没有内膜增生，其余两组可见极少内膜轻度增生，无统计学差异；术后

8、28天，手术组管腔明显狭窄，内膜显著增生，平滑肌细胞排列紊乱，胞核呈圆形及椭圆形。图像分析显示术后28天时黄芪组新生内膜增生厚度和面积较其它组明显减少，见表1。　　表1黄芪对球囊损伤大鼠颈总动脉内皮后内膜增生的影响（略）　　注：*与黄芪组比较，P＜0.05。