大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的高效液相色谱法测定

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1、大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的高效液相色谱法测定作者：陈夏静，姚汉玲，张秋琼，张秀桥，刘焱文【摘要】　　目的建立高效液相色谱法测定大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的方法。方法色谱条件：AngilentTC-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85，V/V），检测波长为290nm。结果蛇葡萄素的回归方程为Y=24061X+40.07（r=0.9999，n=6），线性范围为0.101～1.101μg；平均回收率为99.65%，RSD为1.49%。结论该方法简单、结果可靠，为大叶蛇葡萄药材的质量控制提供了快速准确的测定方法。【关键词】高效液相色谱法

2、；大叶蛇葡萄；蛇葡萄素　　Abstract：ObjectiveTodevelopamethodfordeterminationofthecontentofAmpelopsininA-mpelopsismegalophyllaDielset.GilgbyHPLC.MethodsTheseparationm×250mm,5μm）obilephase，andthedetection.ResultsTheregressionequationandcoefficientpelopsin.Thelinearrangepelopsinethodissimple,accurateandcan

3、beusedforthequalitycontrolofAmpelopsininAmpelopsismegalo-phyllaDielset.Gilg.　　Keypelopsismegalophylla;Ampelopsin　　大叶蛇葡萄AmpelopsismegalophyllaDielset.Gilg是葡萄科蛇葡萄属的一种植物，是湖北恩施地区民间习用中草药，其性平，味酸、涩，具有清热利湿、活血化淤之功效，用于治疗痢疾、泄泻、小便淋痛、头昏目胀、高血压等病［1］。现代药理学研究表明，大叶蛇葡萄中的主要化学成分蛇葡萄素具有多种药理活性，如保肝护肝、抗肿瘤和降压等［2～4］。本

4、实验室已对大叶蛇葡萄有效部位进行了指纹图谱研究［5］。为了更好地控制其质量，本文用高效液相色谱（HPLC）法对不同来源的大叶蛇葡萄中的蛇葡萄素进行了含量测定。　　1仪器与材料　　Agilent-1100系列高效液相色谱仪(四元泵)；紫外检测器及配套色谱工作站；KQ-250B型超声超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AL204型万分之一电子分析天平（Mettler-ToledoGroup）。对照品蛇葡萄素自制，从大叶蛇葡萄中提取分离得到，经UV、MS、H-NMR、IR光谱分析鉴定结构，并经HPLC面积归一化法检测，含量98.0％；大叶蛇葡萄(2009-02采自湖北恩施地区，

5、并由本院生药教研室鉴定)。乙腈为色谱纯；水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：AngilentTC-C18（4.6mm×250mm，5μm）。流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85，V/V）；流速：1ml/mim；柱温：30℃；检测波长：290nm；进样量：10μl。　　2.2对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的蛇葡萄素对照品适量，加甲醇制成每毫升含蛇葡萄素0.101mg的溶液，作为对照品溶液。　　2.3供试品溶液的制备精密称取样品（过60目筛）约0.1g置锥形瓶中，甲醇25ml，浸泡30min,超声提取30min，甲醇定容至30ml，

6、摇匀，过滤，精密吸取续滤液1ml于25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。　　2.4系统适用性实验取对照品溶液、供试品溶液于上述色谱条件下进样，得HPLC图（见图1）。结果在该色谱条件下，供试品在对照品色谱保留时间相应处有相应色谱峰，且样品可得到较好的分离，理论塔板数按蛇葡萄素峰计算大于3000。　　2.5线性范围的考察精密量取对照品溶液1，2，4，6，8，10ml于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，配置成浓度分别为0.0101，0.0202，0.0404，0.0606，0.0808，0.101mg/ml的对照品溶液，按上述色谱条件依次注入高效液相色谱仪，以峰面积（Y

7、）为纵坐标，以标准品的浓度（X）为横坐标，得蛇葡萄素回归方程：Y=24061X+40.07（r=0.9999，n=6）。结果表明，蛇葡萄素对照品在0.101～1.101μg范围呈良好的线性关系。　　2.6精密度实验精密吸取蛇葡萄素对照品溶液10μl，连续进样6次，测定峰面积值，计算RSD为0.66%。结果表明，仪器精密度良好。　　2.7稳定性实验取供试品溶液10μl分别于0，2，6，8，12，24h间隔进行测定，测得结果基本一致，峰面积的RSD为1.20％。结果表明，供试品溶液在24h内稳定。　　2.8