mapk途径在大鼠肝干细胞增殖调控中的作用

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1、MAPK途径在大鼠肝干细胞增殖调控中的作用【摘要】目的探讨ERK1/2、p38-MAPK、PI3K/AKT等信号途径在HGF介导的肝干细胞增殖信号中的作用及其信号转导途径之间的相互联系和作用机制。方法通过in后发生磷酸化，并且完全磷酸化发生在HGF作用15min，1h后逐渐消失。Akt也在HGF作用5min后发生磷酸化，15min后达到完全磷酸化并且持续至少2h。P38MAPK途径也在5min后开始激活，在30min后逐渐减少，持续大约3h；我们还发现，用MAPK抑制剂U0126,SB23580处理后能够明显减低HGF诱导的增殖效应,但是用Ly294002处理阻断PI3K

2、/AKT途径后则并不影响HGF诱导的增殖效应。表明，ERK1/2、p38MAPK途径的激活参与HGF介导的细胞增殖效应，而PI3K/AKT途径则并不参与HGF介导的细胞增殖调控。结论在APK、PI3K/Akt等信号途径。ERK1/2和p38MAPK途径的激活参与HGF介导的细胞增殖效应，而PI3K/AKT途径则并不参与HGF介导的细胞增殖调控。【关键词】肝干细胞；细胞因子；信号转导【Abstract】ObjectiveTostudytheroleofMAPKandPI3KpathediatedproliferationeffectonethodsTodetermineef

3、fectofHGFonERK,P38MAPK,andAKTphosphorylation.Cellsl)stimulation,thanthephosphorylationofERK,p38MAPK,Aktfolloulationineidineincorporation.ResultsTheERK,p38MAPK,Aktpathediatingcellularproliferation.TheproliferationeffectsofHGFcells;cellfactor;signalconductionMAPK是一族胞浆内广泛分布的蛋白激酶，包括细胞外调节蛋白激酶(

4、Extracellular-signalRegulatedKinase,ERK)、P38-MAPK、c-JUNN端激酶(JNK)。在细胞的增殖、分化和生存中起着重要作用［1，2］，多种增殖和抗凋亡信号通过MAPK的激活进行调控。它们参与细胞对各种信号的调节，触发级联性活化，在不同的时间将信号传导至不同的区域，产生如增殖、分化或凋亡等多种生物效应。HGF是一种具有多种生物功能的细胞生存调节因子，能够介导细胞的增殖、离散及抗凋亡作用［1，2］。HGF的信号转导是通过其受体C-met的酪氨酸磷酸化而激发,HGF作用于c-met的β-亚单位C末端多功能位点，导致C-met和一些胞

5、浆信号蛋白的相互作用，依次激活MAPK和磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)等信号途径［3，4］。在大鼠肝干细胞系APK途径？这些信号途径如何参与肝干细胞的增殖调控？为此，我们的研究将探讨MAPK信号途径在HGF介导的信号转导中的调控。1材料与方法1.1主要试剂肝细胞生长因子HepatocytesGroa.不同信号途径的特异抑制剂均购自Promega溶于DMSO。ERK特异抑制剂U0126、PI3K特异抑制剂Ly294002、所用浓度均为20μM。p38MAPK特异抑制剂SB203580，所用浓度为15μM；ERK、p38

6、MAPK，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体,ECL检测系统均为SantaCruz产品。DMEM为Gibco公司产品，胎牛血清为LifeTechnologies公司产品，胰酶为Gibco公司产品，PMSF为Sigma公司产品,PVDF膜为Amersham公司产品。1.2主要仪器及设备细胞培养箱：Heraeus；超净工作台：北京半导体设备一厂；倒置显微镜：重庆光学仪器厂XDS-1；液闪仪:蛋白电泳仪及电转移装置：BIO-RAD美国；成像仪：StratagenEagleeyeII：美国；可见/紫外分光光度仪：Beckman；PM-30自动照相系统：Olympus；Kodak

7、ScientificImagingSystems软件分析系统。1.3细胞培养大鼠;SB20358015μM;Ly29400220μM)预处理，然后加入HGF（40ng/ml）刺激24h,每孔加入1.85×104Bq3H-TdR,3h后收集细胞,以液闪计数表示刺激活性。1.5l)刺激不同时间（0、5、15、30、60、120min），收集细胞，用冰冷的PBS洗细胞3次,加入600μlRIPA裂解液(2×106细胞),置于冰上作用３０min,用细胞刮取器刮下细胞,4℃离心15000g离心，30min,上清即为总的细胞蛋白溶解成分。