丙泊酚对大鼠神经干细胞增殖和迁移的调控

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：丙泊酚对大鼠神经干细胞增殖和迁移的调控答辩委员会主席：薛张纲教授复旦大学附属中山医院答辩委员会成员：高防教授英国伯明翰大学上官王宁副教授温州医科大学附属第二医院论文答辩日期：2014年5月26日万方数据温州医科大学硕士学位论文四、立、六、七、／、．，九、T、目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4—}L—-刚吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71、第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、72、第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1】3、第三部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯154、第四部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3s发表的论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46坼，I^，宝良1／。护．P∥洲，二彳f版坟．立扣昂k却蓼影L7秒婵移．娩玉哆万方数据温州医科大学硕士学位论文缩略词表(按字母顺序)缩写词英文全称中文全

3、称DEPCDiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DⅣ匝MDulbecco’SModifiedEagleMedium达尔伯克氏改良伊格培养基E15TheEmbryoof15days15天的胚胎Edu5-ethynyl一2'-deoxyuridine5．乙炔基．2’．脱氧尿苷PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液q-PCRRaeltimetranscriptasePolymerase实时荧光定量聚合酶链反应法ChainReactionStat3Signaltransducerandactivatorof信号转导与转录激活因子3transcription3So

4、x2SRY(sexdeterminingregionY1-box2性别决定基因相关转录因子一211—6Interleukin一6白细胞介素一6EGFEpidermalgrowthfactor表皮生长因子bFGFBasicfibroblastgrowthfactor碱性成纤维生长因子万方数据温州医科大学硕士学位论文丙泊酚对大鼠神经干细胞增殖和迁移的调控中文摘要目的观察丙泊酚对怀孕15天(E15)大鼠大脑皮层神经干细胞(NSCs)增殖和迁移的影响并探讨问题其可能机制。方法l、分离E15天sD大鼠大脑皮层进行神经干细胞原代培养。以(卜2)*106／ml细胞密度接种，在含有2％B27，20ng／mlb

5、FGF，20ng／mlEGF的DMEM／F12的培养基中培养，并稳定传至第三代。用Nestin细胞免疫化学染色法鉴定神经干细胞，Nestin阳性率大于95％，表示传至第三代的细胞仍为神经干细胞。2、将原代培养至第三代的神经干细胞随机分为4组：空白组，终浓度为0．1％的DMS0组，丙泊酚终浓度为20与50uM组，放入培养箱中继续培养12h。3、取分组的神经干细胞，经药物处理培养2小时后，加入终浓度为10pM的Edu，继续培养4小时后进行Edu免疫荧光染色，用Edu的阳性率检测神经干细胞的增殖能力。4、取分组的神经干细胞，经药物处理培养6小时后，收集神经干细胞按照Tirzal试剂的说明书提取各组细

6、胞的总RNA，再将其逆转录为cDNA后，采用荧光实时定量聚合酶链反应法(Real—TimePeR)检测各组样本中Stat3、Sox2和NotchlmRNA的含量。5、取分组的神经干细胞，经药物处理培养6小时后，收集各组神经干细胞并提取总蛋白，采用Westernblotting法检测Stat3及p-Stat3蛋白含量的表达；6、取分组的神经干细胞，经药物处理培养6小时后，将神经干细胞接种到Transwell板中，用迁移至小板下室的细胞数量表示神经干细胞的迁移能力。结果l、与空白组相比，Edu免疫荧光染色检测结果表明，丙泊酚组促进了神经干细胞增殖能力(P

7、结果发现，丙泊酚组Stat3与Sox2mRNA的含量上升显著(P<0．05)；3、与空白组相比，Westernblotting检测结果表明，丙泊酚组p．Stat3蛋白的表达量增加(尸<0．05)，但总Stat3蛋白表达量无变化；4、与空白组相比，Transwell板检测的结果显示了丙泊酚具有促进神经干细胞迁移的能力(氏0．05)。万方数据温州医科大学硕士学位论文结论丙泊酚可导致神经干细胞的增殖和迁