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1、农杆菌介导甘蓝转化实验摘要：农杆菌是一种革兰氏阴性细菌，能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶祖物和裸子植物的受伤部位，将外源DNA导入受体。本实验主要材料是中甘十一号甘蓝种子。该品种早熟丰产，冬性较强，并且早熟，适于我国华北、东北、西北及平南、中南、西南、华东等部分地区。用屮甘十一号甘蓝种子发芽，接入MS培养基制成无菌苗，超净工作台下取下胚轴和带柄子叶，接入脱分化培养基获得外植体。丙利用LB同体培养基做平板划线培养农杆菌，挑取单菌落在LB液体培养基培养至0D:0.3-0.6。将外祖体在30ml加入了3ml农杆菌的M
2、S0培养基浸泡，完成转导。接回原培养基，7天后移入含500mg/L头孢霉素的抑菌培养基。一星期后进行继代培养，接入300mg/L头孢霉素培养基，再进行结果检测。Abstract:Agrobacteriumisagram-negativebacteria,inthenaturalconditionsbecomeinjuredpartsofinfectionmostdicotsandgymnosperms,exogenousDNAintoreceptor.Themainmaterialofthisexperimentis
3、inthesweetelevencabbageseeds.Thevarietyoftheearlyharvest,winterisstrong,andpremature,suitableforpartsofNorthChina,northeast,northwestandsouthwest,South,SouthernChina,Eastchina.No.elevenseedgerminationofcabbagesweetuse,accesstoMSmediummadeofasepticseedlings,ultr
4、a-cleantablefromhypocotylandcotyledonwithpetioleexplantsdedifferentiation,gainaccessmedium.ThenusingLBsolidmediumplatestreakingcultivationofAgrobacterium,takingonecolonyculturemediumtoOD:0.3-0.6inliquidLB.Theexplantsin30mljoinedthe3mlofAgrobacteriumtumefaciensM
5、SOmediumsoaking,completetransduction.Backtotheoriginalmedium,7daysintothetrichostatin500mg/LcontainingCephalosporiummedium.Aweekafterthesubculture,access300mg/Lcefotaximemedium,thenthetestresults.关键词：甘蓝转基因外植体前言：甘蓝近年来随着国内周年供应需求及出口贸易的增加，出于甘蓝产业发展的需要，甘蓝遗传育种的重要性H益
6、凸显，对遗传育种目标提出许多新的要求。［1］一些新的病害如北方的枯蒌病、啕方的根肿病在生产上相继出现，因而耑要更多的抗病品种；过去订蓝生产主要需要春、秋两季用品种，现在需要提供周年各季节生产和供应的品种；市场对商品品质的要求越来越高，为从根源上弥补甘蓝的缺点，可将外源抗性基因导入。而农杆菌Ti质粒转化与其他基因转化体系相比，有很多优点。［2］首先Ti质粒转化系统转化的外源基因以单拷災为多数，遗传稳定性好，因此转基因植株能较好地为育种提供了中间选育材料。其次Ti质粒转化系统操作比较容易，需要的仪器设备简单，易于推广，也
7、解决了上诉问题。实验方法：1.1选取100粒饱满，无虫害的中甘11号种子，在适当的温度与湿度下保存。［3］2.1无菌苗的获得2.11准备实验：6个培养瓶，1瓶蒸馏水，报纸包好的小烧杯，高压火菌。按照MS培养基配方称取大量元素（稀释20倍）9ml,微量元素，铁盐，有机成分（稀释200倍）分别称取0.9ml。鹿糖30g/L5.4g，琼脂粉7g八1.26g。（按每瓶30ml计算）2.111熬制培养基，并不断用玻璃棒搅拌，注意蔗糖开锅后放，琼脂预先加入冷水中。定容180ml,调PH5.8.用封门膜封好，灭菌冷却。2.12打开
8、超浄工作台的紫外灯30分钟，打开无菌风，将MS培养基分装在6个火菌的瓶子中待凝。点燃酒精灯，分别将铁丝架，镊子反fi灼烧儿次备用。灭菌后的小烧杯放入100粒甘蓝种子和无菌水，摇晃几次，倒掉，再用0.1%的升汞消毒4分半，升汞回收。再用无菌水反复冲洗3次，接入MS培养基，每瓶15粒左右。（发芽率见表一）2.2外植体的获取与预培养一周后，观察六瓶苗
