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1、蒲葵子的体外抗癌活性【关键词】棕榈科;抗肿瘤药;提取法ABSTRACT:ObjectiveToinvestigateanti-tumoreffectoftheextractsofLivistonachinesisinvitro.MethodsThecytotoxiceffectsofthefourkindextractsofLivistonachinesisontorcelllinesculturedinvitroorcelllinesalignanttumorcelllinesN-butanolfor48hoursapproach7.94%and10.72%.Conclusio
2、nTheN-butanolextractsofLivistonachinesishadobviousanti-tumoractivityinvitro.KEYod550,美国Bio-Rad公司);二氧化碳培养箱(美国Forma公司);RPMI1640培养基(美国Gibco公司);小牛血清(美国Hyclone公司);胎牛血清(澳大利亚Maverick公司);四甲基偶氮唑盐(MTT，美国Amresco);胰蛋白酶(美国Difco公司);噻唑蓝(华美生物工程公司北京分公司);其余试剂均为国产分析纯。 1.1.2药物 采集福建福州地区产蒲葵子,经福建医科大学天然药物学系张永宏教授鉴定
3、为棕榈科植物蒲葵的干燥种子。 1.2方法 1.2.1供试品的制备 蒲葵子粗粉1g用70%乙醇10mL回流提取3次(每次2h),合并提取液,浓缩,冷冻干燥,得到醇浸膏。醇浸膏用水30mL混悬,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别得到萃取液,浓缩,冷冻干燥,得到各个萃取部位浸膏。分取适量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位浸膏,以70%乙醇(最大终浓度5‰)助溶,加RPMI1640培养基,配成2000μg/mL样品准备液。各样品准备液以RPMI1640培养基依次稀释成终浓度为1000,333,111,36,12μg/mL等5个浓度供试液,4℃保存,备用。 1.2
4、.2细胞培养 人肝癌细胞株（HepG2）和人早幼粒细胞白血病细胞株（HL60）由福建医科大学药理研究所冻存提供。HepG2、HL60均培养于含10%小牛血清、青霉素100IU/mL及链霉素100μg/mL的RPMI1640培养基中,每3d换液1次,每5d传代1次。细胞均置于37℃、体积分数为0.05的CO2、饱和湿度的培养箱中,取对数生长期细胞用于试验。IR%=(1-加药组平均D值/对照组平均D值)×100% 2结果 2.1萃取部位对HepG2细胞的细胞毒性 对HepG2细胞作用48h后,各萃取部位不同浓度的抑制率呈量效关系。细胞的毒性大小依次为正丁醇>乙酸乙酯&g
5、t;石油醚>氯仿。其中,正丁醇具有较高的细胞毒性,IC50仅为7.94μg/mL(IC50<20μg/mL);乙酸乙酯具有一定的细胞毒性(表1)。表1蒲葵子各萃取部位对HepG2的细胞毒性（略） 2.2萃取部位对HL60细胞的细胞毒性 对HL60细胞作用48h后,采用MTT法比色法,各萃取部位不同浓度的抑制率呈量效关系(表2)。细胞毒性大小依次为正丁醇>乙酸乙酯>石油醚>氯仿。其中,正丁醇和乙酸乙酯都具有较高的细胞毒性,IC50为10.72和17.78μg/mL。表2蒲葵子各萃取部位对HL60的细胞毒性（略） 3讨论蒲葵子在民间被广泛用于治疗各
6、种癌症,其中福建民间将蒲葵子与猪肉一同炖至肉熟烂,饮汤吃肉,用于鼻咽癌、食道癌的治疗。国外文献报道，蒲葵子的水提物对肿瘤血管发生具有较强的抑制作用,且该水提物对人乳腺癌细胞(Mcf-7)、鼠成纤维瘤细胞和人结肠癌细胞(Ht-29)体外抑制作用较强,对成纤维细胞瘤小鼠模型具有较好的治疗效果,未观察到毒副作用;蒲葵子的乙醇提取物(0.1g/mL)对人白血病细胞HL60生长有较强的抑制作用,IC50为1/50倍的提取液(即2μg/mL)［3-4］。本研究采用MTT法对蒲葵子的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位进行体外抗肿瘤活性筛选研究,结果表明,蒲葵子粗提物的上述各萃取部位对Hep
7、G2和HL60细胞有不同程度的抑制作用,均在给药后24h内效果明显。乙酸乙酯对HepG2和HL60胞的最大抑制率分别达到99.52%和99.59%,正丁醇最大抑制率分别达到96.77%和97.12%,正丁醇部位的IC50分别为7.94和10.72μg/mL,说明乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有明显的体外抗肿瘤活性,且有明显的剂量依赖性。本研究为抗肿瘤药物的粗筛,所用的样品为蒲葵子乙醇提取物的各个萃取部位。结果显示,石油醚部位和氯仿部位对HepG2和HL60的作用都不明显。可能是由于石
