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1、白刺总黄酮对血管内皮细胞损伤的保护作用的研究论文张义军樊莲莲张永军李连疆邓峰美唐克韩荣【摘要】目的研究白刺总黄酮对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法用过氧化氢（H2O2）诱导血管内皮细胞损伤,用酶标仪检测细胞内一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）以评价氧化的程度。结果不同浓度的白刺总黄酮可促进受损的内皮细胞修复，同时提高SOD、NOS、GSH-Px活力和NO水平。结论白刺总黄酮具有保护血管内皮细胞损伤的作用，其机制可能与其抗氧化作用有关。【关键词】白刺总黄酮内皮细胞过氧化氢抗氧化白刺为我国的特有种，在新疆干
2、旱地区分布广泛，其果实中含有丰富的营养成分和活性物质，可入药，具有调经活血，消食健脾等功效。课题组对白刺总黄酮进行分离发现含有槲皮素、山萘酚、异鼠李素等黄酮单体化合物.freeloFormo公司)；双向磁力搅拌器(79-2江苏金坛市医疗仪器厂)；电子分析天平(AE-200上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；倒置相差显微镜(BDS200-PH奥特光学OPTEC)；酶标仪(SN-3001ThermoFormo公司)；电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9240上海齐欣科学仪器有限公司)；立式电热压力蒸气灭菌器(LDZX-30FBS上海申安医疗器械厂)。2方法2.1白刺总黄酮的制备取白刺果，
3、75%乙醇进行连续回流提取4次，每次加75%乙醇7倍量回流2h，分别过滤浓缩至浓膏无醇味，用2.5％碳酸钠(pH8)溶解浓膏,过滤；过滤液用50%盐酸调至pH为5,过滤得沉淀用水洗至中性，烘干。利用聚酰胺柱层析分离得白刺总黄酮。对其用SephadexLH-20进行分离纯化得槲皮素［5］。2.2HUVEC的培养及分组HUVEC的原代培养:按文献［6］报道以及在实验中的摸索对方法行进了改进。2007-10～2008-04,在我院妇产科产婴室收集健康胎儿脐带20～40cm,用0.1%胶原蛋白酶得到人胎儿脐静脉内皮细胞。培养于ECM培养液中,置于37℃下5%CO2培养箱中。进行培养传
4、到第3代用于试验。实验分正常对照组、阳性对照组（加75μmol/LH2O2＋槲皮素80μmol/L）、模型组(仅加75μmol/LH2O2)和白刺总黄酮低、中、高3个剂量组(均加75μmol/LH2O2及分别加20μmol/L白刺总黄酮、40μmol/L白刺总黄酮、80μmol/L白刺总黄酮),每组6例。将2×104个/孔HUVEC接种6孔板,在上述条件下孵育24h，分别加入上述浓度的槲皮素和白刺总黄酮，各组细胞孵育24h，然后除正常对照组外加入75μmol/LH2O2诱导损伤，继续培养4h后终止培养，进行有关指标的测定。2.3检测方法NO，NOS，SOD，GSH-Px的具体
5、测定方法参照试剂盒说明书进行。3结果3.1白刺总黄酮对受损内皮细胞NO含量和总型NOS、结构型NOS活力的影响NO不仅能调节血管舒张，还是一种重要的抗炎分子,.freelas-Ecker，AntjeLindecke，ei-pingShen，Zhi-hongYe，etal.Inhibitiveeffectsofanti-oxidativevitaminsonmannitol-inducedapoptosisofvascularendothelialcells［J］.JZhejiangUnivSciB，2006，7(10):825.［5］樊莲莲,刘金荣,王航宇，等.白刺果中总黄酮
6、提取工艺的研究［J］.中国药房，2007，18（3）：186.［6］张敬各，张瑞明，李著华.同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响［J］.四川生理科学杂志，2006，28(4)：151.［7］LandmesserU,DikalovS,PriceSR,etal.Oxidationoftetrahydrobiopterinleadstouncouplingofendothelialcellnitricoxidesynthaseinhypertension［J］.JClinInvest,2003,111(8):1201.［8］DoraAtanassova,Pana
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