蜂胶中总黄酮的分离及其含量测定论文

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1、蜂胶中总黄酮的分离及其含量测定论文【摘要】目的利用聚酰胺柱层析分离蜂胶中总黄酮，并运用紫外分光光度法(UV)对其进行含量测定。方法利用聚酰胺柱层析，干法上样，分别用30％、95％不同浓度的乙醇进行洗脱，盐酸—镁粉反应定性检测及分光光度法定量测定，并对分光光度法进行了改进。结果经定性检测，30％乙醇洗脱液几无黄酮，紫外分光光度法测量95％洗脱液中总黄酮的含量为0.956mg/ml。结论利用聚酰胺柱层析初步纯化蜂胶中总黄酮,并提供了测量蜂胶中总黄酮含量的一种快速、准确的方法—紫外分光光度法.freelinationofFlavonoidsinProplisGAOX

2、iu-rong，ZANentofPharmacy,ChengduMedicalCollege,Chengdu610083China)Abstract：ObjectiveToseparatetheflavonoidsinproplisbypolyamidecolumnchromatographyandtoestablishthemethodofUVfordeterminationofflavonoid.MethodsFlavonoidofproplisidecolumnchromatographyinedbyHd-Mgreactionandultraviolet

3、-visiblespectrophotometry.ResultsThereostnoflavonoidineluateof30%ethanol,theconcentrationofeluateof95%ethanolg/mlbyU-VSpectrophotometry.ConclusionTheflavonoidarilypurifiedbypolyamidecolumnchromatography,andafast,accuratemethod—ultraviolet-visiblespectrophotometryidecolumnchromatogra

4、phy;ultraviolet-visiblespectrophotometry蜂胶（proplis）是蜜蜂从植物树芽、花苞和树干处采集的树胶，并混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等成分而成的一种具有芳香气味的褐色胶状固形物。蜂胶的化学成分极为复杂，其主要活性成分包括黄酮类、萜烯类、有机酸、芳香醛、酯类及多种氨基酸、酶、维生素、矿物质等［1］。黄酮类是蜂胶中最主要的活性物质，具有抗癌，治疗糖尿病，抗菌，抗病毒，抗氧化，调节免疫等多种功能。蜂胶中的黄酮类成分有上百种，但到目前为止仅分离了30多种。为了更加明确蜂胶的有效成分，更加有效地利用蜂胶，本文利用聚酰胺柱层析分离蜂

5、胶中的总黄酮，并运用分光光度法进行了含量测定。1材料与方法1.1主要试剂和仪器1.1.1仪器北京市朝阳区来广营医疗器械厂GD65-1型鼓风干燥箱；上海良平仪器仪表有限公司YB电子天平；上海沪西分析仪器厂DHL-A电脑恒流泵；安捷伦科技上海分析仪器有限公司751Gl,80ml,60ml(每次45min),提取液合并，减压浓缩，得总浸膏7.0g。利用聚酰胺柱色谱粗分，用95％乙醇洗去吸附剂中的醇溶性杂质，干法上样，分别用30％和95％乙醇洗脱，盐酸—镁粉反应，30％洗脱液呈阴性，95％洗脱液呈阳性，证明30％洗脱液中几无黄酮，95％洗脱液中为总黄酮，为供试液。1.

6、2.2运用分光光度法测定供试液中总黄酮的含量1.2.2.1标准液的配制精密称取芦丁标准品20mg，置100ml容量瓶中，80％乙醇溶解，定容，即得0.2mg/ml芦丁标准液。1.2.2.2标准曲线的制备精密吸取芦丁标准液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于10ml容量瓶中，加5％NaNO2试液0.4ml，摇匀，静置6min，加10％Al(NO3)30.4ml，静置6min，加4％NaOH4.0ml，用蒸馏水补足，摇匀。另分别吸取芦丁标准液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于10ml容量瓶中，蒸馏水定容，分别作为上述6管的空白对照

7、（即加相同量的芦丁，不加显色剂作为空白对照）；放置15min，510nm处比色。以浓度（C）与吸光度（A）进行线性回归，得回归方程为A=12.491C－0.0025，R=0.9992。1.2.2.3测定样品含量精密吸取供试品溶液0.5ml，置10ml容量瓶中，以供试液为空白对照，按标准曲线项下方法显色，平行测定5次，并根据标准曲线计算供试液中总黄酮含量。结果见表１。1.2.2.4稳定性试验吸取供试液适量，按标准表195％乙醇洗脱液中总黄酮的含量曲线项下方法在5min，10min，15min，20min时测定，以确定供试液的稳定性。1.2.2.5精密性实验吸取供

8、试液适量，按标准曲线项下方法重复测定5