水曲柳皮总香豆素提取工艺研究论文

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1、水曲柳皮总香豆素提取工艺研究论文.freelandschuricaRupr．ｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎ．MethodsＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎＬ９（３４）.freelandschuricaRupr．KeyandschuricaRupr；Ｆｒａｘｉｎｏｌ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ；Ｃｏｕｍａｒｉｎｓ水曲柳FraxinusmandschuricaＲｕｐｒ．是一种落叶乔木，高度可达３０ｍ，直径超过１ｍ，主要分布于我国大兴安岭东部和小兴安岭、长白山等地。水曲柳为优质木材，但水曲柳皮却没有被充分开发利用，只在民间作为抗

2、风湿的偏方使用（文献记载可做秦皮代用品［１］），其化学成分国外有见报道，国内很少有人研究，其药效价值还有待开发。已发现其树皮跟同属植物一样主要含有香豆素类成分，现已发现的香豆素类有秦皮甲素（Ｅｓｃｕｌｉｎ），秦皮乙素（Ｅｓｃｕｌｅｔｉｎ），秦皮苷（Ｆｒａｘｉｎ），异秦皮定（Ｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ），白蜡树精（Ｍａｎｄｓｈｕｒｉｎ，Ｆｒａｘｉｎｏｌ）［２，３］。研究其香豆素类成分对水曲柳皮的开发利用以及防治病虫害都有意义。1仪器与材料１．1仪器７２２型光栅分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司），梅特勒ＡＢ１３５－Ｓ十万分之一天平（德国），ＨＨ－４２快

3、速恒温数显水箱（常州国华电器有限公司）。１．2试药水曲柳采自长白山，经吉林大学药学院张静敏教授鉴定为水曲柳FraxinusmandschuricaＲｕｐｒ．；标准品白蜡树精（自制），经过１Ｈ－ＮＭＲ，１３Ｃ－ＮＭＲ鉴定，ＨＰＬＣ峰面积归一化法测定其含量达９８％以上；其它试剂为分析纯。2方法与结果２．１标准曲线的绘制精密称取白蜡树精对照品，置于５０ｍｌ容量瓶中，加入适量甲醇溶解并定容至刻度，配制成含白蜡树精０．１ｍｇ／ｍｌ的原对照品溶液。精密吸取对照品溶液适量，加甲醇定容至５０ｍｌ，配制成含白蜡树精分别为８，１６，２４，３２，４０μｇ／ｍｌ的对照品系列溶

4、液。于３３４ｎｍ处测定吸收度，并以吸光度与对照品浓度进行回归，得标准曲线方程Y＝０．０３６X－０．０２１９，r＝０．９９９７（n＝５）。实验表明白蜡树精在８～４０μｇ／ｍｌ浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。２．２精密度实验精密吸取上述原对照品溶液适量２ｍｌ，加甲醇稀释至１０ｍｌ，于３３４ｎｍ处测定吸光度，连续６次，结果表明６次测定的RSD为０．５４％，故仪器精密度良好。２．３稳定性实验将精密度实验项下的对照品溶液于０，１，２，４，６，８ｈ在３３４ｎｍ处测定吸光度，实验结果表明RSD＝０．９３％，对照品溶液在８ｈ内稳定性良好。２．４重现性实验取水曲柳皮

5、粗粉６份各２ｇ，精密称定后置于５０ｍｌ容量瓶中，加甲醇至刻度线，超声３０ｍｉｎ，过滤，取滤液稀释２０倍后分别于３３４ｎｍ处测定吸光度，并计算其含量，实验结果６个样品含量RSD＝１．５７％，表明本法重现性良好。２．５加样回收率实验取已知重现性实验项下的６份样品中的任意一份，精密吸取１ｍｌ，稀释２０倍后，准确加入一定量的对照品溶液，混匀，在３３４ｎｍ处测定吸光度，计算白蜡树精的平均加样回收率为９８．２％，RSD＝２．０７％（n＝６）。２．6正交实验设计优化以水曲柳中总香豆素为考察指标，选择超声提取工艺中４个主要影响因素：浸渍时间（Ａ），乙醇浓度（Ｂ），水浴

6、温度（Ｃ），提取时间（Ｄ）进行优化提取水曲柳中香豆素的条件。研究方法采用正交设计，每个因素选择３个水平，以Ｌ９（３４）正交表安排实验，具体影响因素及实验水平见表１。表1因素水平（略）每一实验号取水曲柳皮粗粉２．０ｇ，精密称定后置于５０ｍｌ容量瓶中，加甲醇至刻度线，按要求浸渍一定时间后在设定的水浴温度下进行超声提取，取出冷却至室温，过滤，取滤液稀释２０倍后进行测定，各实验号平行操作重复３次。结果见表２。由表２极差Ｒ比较可知，影响水曲柳总香豆素提取的因素主次顺序为Ｂ＞Ｄ＞Ａ＞Ｃ，即乙醇浓度最重要，超声时间次之。按表２的Ｋ值直观分析，得出超声提取最佳工艺组合

7、为Ｂ３Ｄ３Ａ２Ｃ３。进一步经方差分析表明乙醇浓度和超声提取时间均对总香豆素的提取具有非常显著性差异。表2L9（34）正交实验设计及结果分析（略）3讨论由于水曲柳中的秦皮乙素与秦皮甲素的含量相对较低，但白蜡树精的化学性质稳定，所以本实验选择白蜡树精为对照品考察检测条件的可行性。游离香豆素能溶于沸水，难溶于冷水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等溶剂；香豆素苷类能溶于水、甲醇、乙醇，而难溶于乙醚、苯等极性小的溶剂［４］。考虑对总香豆素的溶解与溶剂的毒性，本实验选择乙醇作为提取水曲柳中总香豆素的溶剂。通过正交实验设计及方差分析，表明乙醇浓度和超声提取时间均对总香

8、豆素的提取具有非常显著性差异，而水浴温度与浸渍时间没有显著性差异，结合实际条件，优选出水曲柳皮