奥曲肽对人卵巢癌细胞增殖影响的实验研究

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1、奥曲肽对人卵巢癌细胞增殖影响的实验研究【摘要】目的探讨生长抑素类似物奥曲肽（OCT）在体内对人卵巢癌细胞株SKOV3生长的影响。方法建立人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤模型，随机分成4组：对照组、奥曲肽组、顺铂组及奥曲肽顺铂联用组，分别予生理盐水、奥曲肽、顺铂及两药联用处理，处死裸鼠后肿瘤标本采用流式细胞仪检测细胞周期，免疫组织化学法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果各用药组瘤重、瘤体积、VEGF的表达均低于生理盐水组（P<0.05）,但用药组两两间比较差异无显著性。结论奥曲肽能抑制体内人卵

2、巢癌细胞株SKOV3生长，对肿瘤VEGF表达的抑制可能为其抑瘤机制之一。【关键词】奥曲肽；卵巢癌；细胞周期；血管内皮生长因子Effectofoctreotideonthegroanovariancancercelllineinexperimentalstudy【Abstract】ObjectiveToapproachtheeffectofoctreotideonthegroanovariancancercelllineSKOV3invivo.MethodsMetastaticmodelsimulatinghu

3、manovariancancerplantationoftheovariancancercelllineSKOV3intonudemice.Animalslydividedandsubmittedtodifferenttreatmentgroups:controlgrouptreatedalsaline，octreotidegroupiceorsamplesinedbyfloetry，VEGFexpressioninedbyimmunohistochemistryoreandtheexpressionofVE

4、GFicethaninthecontrolmice(P<0.05)，butthereanovariancancercelllineSKOV3invivo，themechanismmaybedoatostatin,SST)是一种环状多肽类激素,由Brazeau等［1］于1973年从羊下丘脑中分离提取。现在认为SST对许多疾病如肿瘤、炎症、糖尿病、癫痫、早老性痴呆、帕金森病、亨廷顿舞蹈病以及艾滋病的发生、发展以及防治具有重要的意义［2］。奥曲肽(SMS-201995,OCT)为生长抑素8肽类似物,是第一个用

5、于临床的生长抑素类似物，目前其主要用于肝癌、胃癌、胰腺癌的辅助治疗。目前国内外关于奥曲肽对卵巢癌作用的研究报道较少。本实验通过裸鼠移植瘤模型观察奥曲肽对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并初探其作用机制。1材料与方法1.1材料(1)基础培养液：RPMI1640，加入10%小牛血清(杭州四季青生物公司)。(2)胰蛋白酶(上海华美公司)：溶于D-Hanks液中配制成0.25%浓度。(3)生长抑素类似物奥曲肽：由上海子能制药有限公司合成。(4)顺铂(Cisplatin):山东齐鲁制药厂产品，4℃保存。(5)人卵巢癌

6、细胞株SKOV3：购自第四军医大学西京医院妇产科实验室。细胞置于37℃,5%CO2培养箱中培养，0.25%胰蛋白酶消化细胞成单细胞悬液。(6)雌性BALB/c-nu/nu裸小鼠：购自中国医学科学院实验动物研究所，体重18～22g，SPF环境下饲养。(7)兔抗人血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体：购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.2方法1.2.1卵巢癌裸鼠移植瘤模型的建立将SKOV3细胞制成单细胞悬液,以5×106个细胞/只，接种于裸鼠右侧腋窝靠近背部皮下，共接种20只。1.2.2药物干预移植瘤建模2周

7、后将20只裸鼠随机分成4组,每组5只，4组分别为空白对照组、奥曲肽组、顺铂组、奥曲肽与顺铂联用组。空白对照组皮下注射生理盐水100μg/（kg·d），1次/d；奥曲肽组皮下注射奥曲肽100μg/（kg·d）,1次/d；顺铂组分别于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射顺铂4mg/kg；奥曲肽与顺铂联用组皮下注射奥曲肽100μg/（kg·d）,1次/d,并于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射顺铂4mg/kg。用药4周后颈椎脱位法处死裸鼠，皮下剥离瘤体，称取肿瘤重量，游标卡尺测量肿瘤长径（a）和短径（b），按公式

8、V=ab2/2计算肿瘤体积。抑瘤率=(对照组瘤体积-实验组瘤体积)/对照组瘤体积×100%。肿瘤标本分为两份，一份置于10％中性缓冲福尔马林液中固定，常规脱水，透明，浸蜡，包埋，5μm连续切片。另一份立即制成单细胞悬液行流式细胞分析。1.2.3流式细胞仪分析细胞周期肿瘤组织采用机械法分离，制备成浓度为1×106/ml的单细胞悬液，70％乙醇固定，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液，加200μlRNa