奥曲肽对人胃癌细胞增殖的抑制作用研究

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1、奥曲肽对人胃癌细胞增殖的抑制作用研究：杜文琪张南征马文青【摘要】目的观察奥曲肽(octreotide，OCT)对人胃癌细胞多种生物学行为的抑制作用，并探讨部分机制。方法MTT比色分析法测定OCT对胃癌细胞系MKN45生长的影响，流式细胞术检测细胞周期的改变，平板集落实验观察细胞集落形成能力，裸鼠移植瘤形成实验体内观察OCT对胃癌的作用，放免法观察OCT对细胞因子生长抑素（epidermalgroinggrool/L作用最强；OCT诱导肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞，以OCT作用24h时最明显；OCT可显著抑制细胞的集落形成能

2、力，并显著抑制裸鼠移植瘤的形成。OCT作用后细胞分泌EGF、TGF-α的量均明显减少。结论OCT在体内、体外均能有效抑制胃癌细胞MKN45的生长,可作为胃癌辅助治疗手段之一。【关键词】胃肿瘤；生长抑素；细胞周期；生长抑素；转化生长因子-αAbstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofsomatostatinanalogueoctreotide(OCT)onthegroechanism．MethodsTheeffectofOCToncellproliferationinvitroine

3、dbyMTT.Cellcycleetry.PlatecolonyformationassayinetheabilityofcolonyformationofMKN45cells.TumortransplantationinnudemiceedtoobservetheeffectofOCTongastriccancerinvivo.ThecontentsofepidermalgroinggroediaeasuredbyRIA.ResultsThegroannerandostpotentattheconcentrationof

4、10-6mol/L．OCTarrestedthecellcycleatG0/G1phraseandreducedcolonyformation.TherepressionpotentialofOCTonthegroiceediaofMKN45cellsaybeapromisingadjuvanttherapyforgastriccancer.Keyatostatin；cellcycle；epidermalgroinggrog/支，瑞士诺华制药)，RPMI1640培养基(Gibco)，胎牛血清(杭州四季青公司)，胰蛋白酶、P

5、ropidiumiodide（PI）、3-（4，5-dimethylthiazol-2-YL）-2，5-diphenyltetrazoliumbromide（MTT）(Sigma)，生长抑素(EGF)RIA试剂盒(北京华英放射免疫技术研究所)、转化生长因子-α(TGF-α)RIA试剂盒（中国人民解放军总医院放免研究所）。1.2细胞培养人胃癌细胞株MKN45生长于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中，内加青霉素100×103U/L，链霉素100mg/L，37℃、5%CO2浓度及饱和湿度条件下常规培养。细胞呈单层贴壁生长

6、，每3～4天以0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA（1∶1）消化液消化传代。1.3MTT比色分析法对数生长期的MKN45细胞消化后调整细胞密度为1×105/ml，接种于96孔板，每孔100μl，另加培养基100μl。37℃、5%CO2条件下培养24h后，更换无血清培养基继续培养24h分组：设空白组（不加细胞）、对照组（不加药）、OCT组（分为10-6、10-7、10-8、10-9mol/L4个浓度），每组6个复孔。继续培养72h，每24h更换新鲜培养基和奥曲肽。终止培养前4h加入MTT40μl/孔，避光孵育。结束培养时，

7、吸去全部上清液，加入DMSO200μl/孔，微孔板震荡器震荡10min，酶联检测仪上测定光密度（D）值（λ=550nm）。按下列公式计算细胞抑制率：抑制率=［（对照组D值-空白组D值）-（实验组D值-空白组D值）］/（对照组D值-空白组D值）×100%1.4平板集落形成实验对数生长期的MKN45细胞消化后吹打成单细胞悬液。将1000个细胞接种于含液体培养基的普通平皿中(平皿直径为9cm)，分设对照组（不加药）和OCT组（培养基中加新鲜OCT，浓度为10-6mol／L），37℃、5%CO2孵箱中培养至细胞形成典型集落；以包含

8、50个以上细胞为一个集落进行计数，普通平皿中的细胞经固定、苏木精-伊红染色、倒置显微镜下计数细胞集落。1.5流式细胞技术检测细胞周期对数生长期的MKN45细胞消化后调整细胞密度为1×105/ml，接种于50ml培养瓶，每瓶2ml。无血清培养基同步化24h后分组，设0、6、12、24、36、48h共计6个