不同组织来源的成纤维细胞的生物学特性比较论文

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1、不同组织来源的成纤维细胞的生物学特性比较论文.freelnormalhumandermal.freelarycultureassesintoculturebottles.Thefibroblasts，afterbeingisolatedfromdifferenttissues，ployedtomeasuretheDNAmetabolismandcollagensynthesisofthecellsrespectively.RESULTSKeloidfibroblastshadamuchmoreactivebio-logicalcharacteristicthan

2、thatoftheothertaldermalfibroblastsandhypertrophicscarones.CONCLU┐SIONFibroblastsderivedfromdifferenttissueshavetheiroakesitnecessaryforustodotheresearchondifferenttissuesalskinfi-broblast，NsFb）、增生性瘢痕成纤维细胞（hyper-trophicscarfibroblast，HTsFb）及瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloidfibroblast，KFb）.标本剪去表皮及皮下组织，

3、在小瓶中剪成碎组织块（0.5mm×0.5mm×0.5mm），接种于25mL培养瓶中，37.0℃，50mLL-1CO2孵箱中孵育4～6h后加入含100mLL-1小牛血清的DMEM培养基，继续培养，2～3d换液1次，待细胞长出后即为原代成纤维细胞.当原代成纤维细胞达到80%～90%融合时，用2.5gL-1胰蛋白酶消化收集细胞，用含10mLL-1小牛血清的DMEM重悬细胞，按13传代，实验用第3～6代.1.3观测指标①细胞增殖.计数法:将三种细胞取相同代数并于其对数生长期时同时消化并制备单细胞悬液，调整细胞浓度为5×106L-1，将细胞按1mL/孔接种48孔培养板，每

4、种细胞设1个复孔，共设12组.置孵箱培养24h后以2.5gL-1胰蛋白酶消化第一组细胞并以胎盼蓝做活细胞染色，在镜下计数，此后每日于相同时间点连续测量12d，依所得数据绘制细胞数-时间的细胞生长曲线.四唑盐（MTT）比色法:同上法接种细胞并于24h后将第一组细胞每孔加入80μLMTT（20gL-1），继续孵育4h后弃去上清，再每孔加入0.5mL二甲基亚砜，振荡30min后选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定个孔的吸光度，此后每日于相同时间点连续测量12d并绘制吸光度值-时间的细胞生长曲线.②细胞DNA合成的测定.胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，为

5、DNA合成所必需，因此用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入其合成代谢过程，通过检测细胞放射性强度可以反映出细胞DNA的代谢情况.接种细胞于48孔板，每种细胞设8个复孔，每孔细胞数为1×104，于接种后24h换液并每孔加入1μci3H-TdR，继续培养12h后弃培养基，用37℃PBS缓冲液冲洗培养板10次，风干后每孔加入2molL-1NaOH200μL，室温放置30min，镜下观察细胞完全溶解后将各孔溶液分别收集于纤维滤纸上，于BeckmanLS-6500型液闪计数仪上测定cpm值.③细胞胶原合成的测定.脯氨酸是成纤维细胞合成胶原所必需的

6、氨基酸之一，因此3H-脯氨酸作为胶原合成的前体能掺入其合成代谢过程.同上法接种细胞于48孔板，于接种后12h换液，继续孵育24h后进行3H-脯氨酸掺入:配制β-氨基丙腈，L-维生素C，3H-脯氨酸混合液，终浓度分别为100gL-1，50gL-1，10ciL-1，按每孔100μL进行掺入，孵育24h后收集并进行cpm值测定.统计学处理:数据以x±s表示，应用Origin软件进行组间t检验.2结果2.1原代成纤维细胞的生长结果表明，KFb游出组织块的速度明显快于NsFb及HTsFb（P0.05）;在细胞的生长方面也以KFb为最快，NsFb次之，HTsFb最慢（Fig

7、1～3）.图1－图3略2.2细胞的增殖细胞记数法与MTT比色法均显示，KFb的生长增殖明显较NsFb与HTsFb快，表现为进入对数生长期的时间短而持续时间长且没有明显的平台期;HTsFb的增殖较NsFb略慢，但基本趋势一致，无明显区别（Fig4）.2.3细胞的DNA代谢及胶原合成结果表明，KFb的DNA合成量及胶原合成量均明显高于NsFb与HTsFb（P0.05），后两者在DNA合成方面无明显区别，在胶原合成方面HTsFb略高于NsFb（Fig5，6）.图4－图6略3讨论烧伤及皮肤损伤是临床上较常见的病种，其损伤后的愈合过程是一系列修复细胞如表皮细胞、成纤维细胞

8、及内皮细胞等与细胞外基质