初探山慈姑及其伪品对酪氨酸酶活性的影响论文

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1、初探山慈姑及其伪品对酪氨酸酶活性的影响论文黄小容,王慧娟，贺定祥，周英【摘要】目的初探山慈姑及其伪品对酪氨酸酶活性的影响。方法采用多巴色素法，底物为L-多巴，测定山慈姑及其伪品提取物对酪氨酸酶的激活作用；薄层色谱法对药材中的酪氨酸进行定性鉴别。结果山慈姑的激活作用最高，丽江山慈姑和金果榄作用不明显，白及呈抑制作用；薄层检测显示山慈姑、丽江山慈姑和金果榄中含有酪氨酸。结论初步认为酪氨酸为山慈姑等激活酪氨酸酶活性作用的主要成分之一。【关键词】山慈姑;伪品;酪氨酸酶;酪氨酸;激活作用Abstract：Objectiv

2、eTheeffectsofCremastraappendiculata(D.Don)MakinoandspuriousbreedontheactivityoftyrosinaseinedbythedopachromemethodusingL-DOPAasthesubstrateandtheamountofdopachromeinthereactiommixtureeasuredbyspectrophotometer.Tyrosineastraappendiculata(D.Don)Makinosignifica

3、ntlyincreasedtheactivityoftyrosinase,buttheRhizomaBletillaeinhibited.TheCremastraappendiculata(D.Don)Makino,IphigeniaindicaKunthetBenthandTinosporacapilipesGagnephadtyrosine.ConclusionTyrosineisoneofthemajorponentsoftheCremastraappendiculata(D.Don)Makino,Iph

4、igeniaindicaKunthetBenthandTinosporacapilipesGagneptostimulatetheactivityoftyrosinase.KeyastraappendiculataMakino;Spuriousbreed;Tyrosinase;Tyrosine;Effect酪氨酸酶又称多酚氧化酶,是哺乳动物体内黑素代谢的关键酶。对酪氨酸酶活性调节可直接影响黑色素的合成，其中酪氨酸、多巴、铜等可影响酪氨酸酶的活性［1］.freela公司产品)，酪氨酸(从山慈姑中分离得到)，其它试

5、剂均为市售分析纯。T6新世纪紫外可见分光光度计(北京谱析通用仪器有限责任公司)，FA2004电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司)。2方法2.1样品的制备山慈姑、白及、金果榄和丽江山慈姑生药粉碎(100目)，各称取4g，分别用50%乙醇40ml浸泡14d。过滤，取续滤液1ml，用pH6.8磷酸缓冲液定容至25ml，备用。2.2酪氨酸酶活性测定参照Matsuda等［5］报道方法。分别取上述样品液2ml，依次加入0.004mol/L的L-多巴反应液2ml与蘑菇酪氨酸酶2ml(200U)，混合，立即置分光光度计上于

6、475nm处测吸收值，每分钟记录一次，连续记录20min。同时，以pH6.8磷酸缓冲液作为空白对照。酪氨酸酶激活率按下列公式计算。激活率（%）=［(C-D)/t-(A-B)/t］/(A-B)/t×100%。其中，A=A475-药+酶；B=A475-药-酶；C=A475+药+酶；D=A475+药-酶，t为相对应的时间。2.3数据处理和统计方法采用配对计量资料t检验，实验重复3次。2.4薄层层析分别取白及、金果榄、山慈姑、丽江山慈姑、酪氨酸溶液点样于同一块硅胶薄层板上，编号为1、2、3、4、5。以正丁醇-水-乙酸(

7、4∶1∶1)为展开剂，展开，晾干。喷以1%茚三酮乙醇溶液，吹干，显色。3结果3.1山慈姑和丽江山慈姑均有激活酪氨酸酶活性的作用，金果榄的作用不明显，白及则显示抑制酪氨酸酶活性的作用见表1。表1山慈姑及伪品提取物对酪氨酸酶活性的激活率（略）3.2经显色后，在相同位置处，酪氨酸、金果榄、山慈姑和丽江山慈姑有一紫色斑点，白及则没有。表明金果榄、山慈姑和丽江山慈姑中有酪氨酸存在见图1。4讨论通过山慈姑及其伪品对酪氨酸酶激活率的比较，山慈姑的活性最强，丽江山慈姑次之，金果榄几乎无活性，白及则显示抑制作用。这对临床上治疗色

8、素障碍性皮肤病药物选用时，具有一定的指导作用。由薄层鉴定可知，酪氨酸是山慈姑、丽江山慈姑激活酪氨酸酶活性作用的主要成分之一；白及中不含酪氨酸，且由于其它成分的存在呈现抑制作用。作者对呈现抑制作用的白及组中加入一定量的酪氨酸(其它条件相同)，在475nm处测量，抑制率为-11.88%。加入酪氨酸后虽然降低了抑制率，但并没有达到预期使其激活的效果。因此，酪氨酸含量的高低与激活作用是否呈正比