玉米源单体肽TPM对酪氨酸酶活性的影响

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1、分类号：Q519单位代码：10183研究生学号：2015344012密级：公开吉林大学硕士学位论文（专业学位）玉米源单体肽TPM对酪氨酸酶活性的影响EffectofMaizeMonomerPeptideTPMonTyrosinaseActivity作者姓名：李娜类别：生物工程领域（方向）：酶与纳米生物技术指导教师：徐力教授培养单位：生命科学学院2018年6月玉米源单体肽TPM对酪氨酸酶活性的影响EffectofMaizeMonomerPeptideTPMonTyrosinaseActivity作者姓名：李娜领域（方向）：生物工程指导

2、教师：徐力教授类别：理学硕士答辩日期：2018年5月29日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本

3、文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期：年冰月日＞０Ｓ｜巧中文摘要玉米源单体肽TPM对酪氨酸酶活性的影响随着社会经济和文化水平的不断提高，越来越多的女性开始注重护肤美容。所以市场上对有效美白化妆品的需求在增加，寻找有效的、毒性低的美白产品已经成为了许多科研工作者的研究热点。存在于动植物细胞内的黑色素是造成皮肤表面色素沉积的主要原因，其合成受到酪氨酸酶的调节。酪氨酸酶是黑色素合成关键酶，同时受相应抑制剂的调节，因此适宜的酪氨酸酶抑制剂

4、将对黑色素的合成起到至关重要的作用。目前，市场上的很多美白产品是经过人工合成的，这些产品的副作用还尚未清晰，寻找天然的、毒性低的美白产品十分必要。经过对本实验室几种活性肽进行分析，我们发现由玉米蛋白酶解后纯化提取而得到的玉米源单体活性肽（TPM）在对酪氨酸酶的抑制以及抗氧化等方面有非常好的效果。在本课题中，我们以TPM为研究对象，通过体外生化实验来研究TPM对酪氨酸酶在抑制动力学等方面的作用，分子对接实验模拟了酪氨酸酶与TPM的相互作用的氨基酸位点。同时利用TPM对小鼠黑色素瘤（B16-F10）细胞在形态方面、细胞增值率、酪氨酸酶活

5、性和黑色素的生成量方面进行研究，我们应用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行抗氧化作用研究。1、借助酶标仪等方法，进行检测TPM对酪氨酸酶抑制情况。在pH6.8的条件下，以酪氨酸作为底物，温度37℃建立反应体系。TPM抑制酪氨酸酶时，会随浓度变化有所不同，当抑制率在50%时，TPM半抑制的浓度IC50值为1.11mM。2、利用Autodock软件对TPM与酪氨酸酶的结合方式进行研究，发现TPM与酪氨酸酶中GLN41，GLN44，GLU173，ASN174，LYS180，HIS182等氨基酸的有相互作用，两者的结合能为-0.9kcal/

6、mol。同时TPM也很有可能通过自身的羟基和苯环结构对酪氨酸酶起到抑制作用。3、利用倒置显微镜观察不同浓度TPM对小鼠黑色素瘤细胞在形态上的影响；利用MTT实验法观察TPM对细胞增殖造成的影响；利用L-多巴氧化法来检测TPM对B16-F10细胞在酪氨酸酶活性上造成的影响，利用氢氧化钠被裂解I的方法，研究TPM对抑制细胞黑色素生成影响。结果证明：TPM可抑制细胞内存在的酪氨酸酶的活性，从而抑制黑色素生成，同时对细胞产生的毒性小于同浓度下的α-Arbutin。4、利用H2O2对人脐静脉上皮细胞进行损伤实验，来检测TPM及熊果苷在抗氧化方

7、面的情况。单独用H2O2处理细胞时，HUVEC存活率为51.1%，在TPM浓度为900μg/mL时，细胞存活率达90.8%，细胞的存活率呈现浓度依赖性。细胞内的ROS含量检测结果表明，只加入H2O2组胞内ROS含量是加入900μg/mLTPM的1.49倍，TPM可明显降低胞内氧化自由基浓度，随TPM浓度增加，自由基受清除效果更明显。关键词：玉米源单体肽；酪氨酸酶；分子对接；抗氧化IIAbstractWiththecontinuousabstractimprovementofthesocialandeconomicandcultura

8、llevels,moreandmorewomenbegintopayattentiontoskincareandbeauty.Atpresent,thedemandforwhiteningcosmeticsisincreasing,s