染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞skov论文

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1、染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞SKOV论文袁鹏，黄艳红，辛晓燕，宋晖，田爽，王德堂【关键词】染料binedacellSKOV3【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofgenisteinbinedacellSKOV3.METHODS:ThegroorphologicalalterationsofSKOV3cellsonstratedbyHoechst33342stainingunderafluorescencemicroscopeandapoptosisandcellcycled

2、istributionetry.RESULTS:Variousconcentrationsofgenisteininbination0.586to0.869,provethegroayberelatedtotheG2/MarrestandthedisturbanceofSphasebygenistein.【Keys;drugsynergism【摘要】目的：探讨染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞系SKOV3增殖与凋亡的影响.方法：采用MTT比色法检测染料木黄酮和顺铂联用对SKOV3细胞增殖的影响，Hoechst染色荧光显

3、微镜下观察联合用药后细胞形态的改变，流式细胞仪分析细胞周期并检测凋亡率.结果：联用不同浓度的染料木黄酮后顺铂对SKOV3细胞IC50降低率为32.3%~79.8%,两药联合作用系数在0.586~0.869之间.freela公司)；四甲基偶氮唑蓝(MTT)(Amresco公司).细胞周期检测试剂盒为DNAPrepStainkit(BeckmanCoulter公司)；K3型全自动酶标仪(LabsystemsDragon公司)；ELITEESP型流式细胞仪（BeckmanCoulter公司）.1.2方法1.2.1MTT法检测细

4、胞增殖抑制率取对数生长期的SKOV3细胞，8×103个/孔接种于96孔培养板，置37℃，50mL/LCO2培养箱培养12h，细胞贴壁后弃去培养液，然后加入含不同浓度药物的培养基200μL：对照组只加RPMI1640培养基(100mL/L小牛血清)；顺铂组加入顺铂浓度分别为0.625，1.25，2.5，5，10，20mg/L的培养基；染料木黄酮组加入染料木黄酮浓度分别为2.5，5，10，20，30，40，50mg/L的培养基；染料木黄酮和顺铂联用组为2.5，5，10，20mg/L的染料木黄酮与顺铂联用，顺铂浓度同单药组，每

5、组均设6个复孔.继续培养至加药后96h，每孔加入MTT(5g/L,20μL),继续孵育4h后弃培养液，每孔加入DMSO150μL，振荡10min，用酶标仪检测各孔吸光值(A490nm)，按以下公式计算：细胞增殖抑制率=（对照组A490nm-实验组A490nm）/对照组A490nm×100%，取6复孔均值绘制抑制率与药物剂量关系曲线，按作图法求出半数抑制浓度（IC50）.同时采用联合作用指数(binedindex，CI)判断染料木黄酮和顺铂联用的性质.CI=DA／ICX,A+DB／ICX,B(A，B代表两种不同药物，ICX

6、,A和ICX,.freelg/L），染料木黄酮（10mg/L）和染料木黄酮（10mg/L）+顺铂（2.5mg/L）.继续培养36h，固定后加入0.5mLHoechst33342（10mg/L），染色15min后弃染液清洗，抗荧光淬灭液封片，紫外光激发，在荧光显微镜下观察.1.2.3流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化收集SKOV3细胞，调整细胞密度为5×107/L，以每瓶8mL接种于75mL培养瓶，细胞贴壁后弃去培养液，加入含不同浓度药物的培养基.根据MTT结果，顺铂浓度选2.5mg/L,染料木黄酮浓度选5和10mg/L，

7、设对照、单药和联用共6组.加药36h后收集细胞，分别按DNAPrepStainKit试剂盒和ApoptosisDetectionKit试剂盒说明书进行细胞固定、染色，上流式细胞仪分析.统计学处理：SPSS11.0软件进行秩相关分析.2结果2.1染料木黄酮与顺铂联用对SKOV3细胞增殖的影响染料木黄酮、顺铂单药的IC50分别为30.0mg/L和9.9mg/L，4种不同浓度的染料木黄酮与顺铂联用后顺铂的IC50明显降低，与单用顺铂组比较，4种不同浓度的染料木黄酮可使顺铂的IC50分别降低到6.7，4.2，2.5和2.0mg/

8、L（图1）.当达到半数抑制时，不同浓度组合的染料木黄酮与顺铂的CI分别为0.760，0.591，0.586，0.869.其中10和5mg/L染料木黄酮与顺铂联用达到高度协同作用；20.0mg/L和2.5mg/L染料木黄酮与顺铂联用分别达到低、中度协同作用.2.2染料木黄酮与顺铂联用后SKOV3细胞形态的改变对照组细胞