genistein对耐药卵巢癌细胞skov3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响

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1、Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响【摘要】探讨GenistEin对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响。方法采用MTT法检测GenistEIn单用及合用顺铂对细胞增殖的影响，流式细胞仪分析Genistein及Genistein联合顺铂对细胞周期和凋亡的影响。结果Genistein对SKOV3细胞增殖表现出浓度依赖性的抑制作用，并显著提高了其对顺铂的敏感性（P<0.05）；0.625～5μg/ml顺铂与2.5～10μg/mlGenistein合用基本表现为协同作用。5、10μg/mlGenistein均可将细胞阻滞于G2/

2、M期并诱导一定程度的凋亡，10μg/mlGenistein还可进一步的干扰S期进程；当顺铂与Genistein合用时，两种药物在干扰SKOV3细胞周期和诱导凋亡方面表现为显著的协同效应。结论Genistein能够抑制耐药卵巢癌细胞SKOV3的增殖，并显著增强该细胞对顺铂的敏感性。【关键词】Genistein顺铂卵巢癌耐药　　0引言　　肿瘤耐药是卵巢癌患者生存率低的重要原因，因此迫切需要新型有效的化疗方案。Genistein（又称染料木黄酮）是一种有潜力的化疗增敏剂，广泛存在于大豆和多种中草药中，具有预防肿瘤的作用。近来研究表明Genistein还可以增强多种耐药肿瘤细胞对化疗药物的

3、敏感性[1,2]，但Genistein是否可以增强耐药卵巢癌细胞对顺铂的敏感性尚未见报道。本文从增殖、凋亡和顺铂敏感性方面分析了Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3的影响。　　1材料与方法　　1.1材料　　人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3，由本科实验室保存，该细胞系对顺铂等多种药物耐药[3]。Genistein、二甲基亚砜（DMSO）购自Sigma，Genistein用DMSO配成储备液（10mg/ml），20℃保存；顺铂（齐鲁制药厂）；噻唑蓝(MTT)购自Amresco。细胞周期试剂盒为DNAPrepStainkit(BECKMANCOULTER)；Anne

4、xinVFITC/PI凋亡试剂盒为ApoptosisDetectionKit(Biovision)。全自动酶标仪为K3型(LabsystemsDragon)；流式细胞仪为ELITEESP型（BECKMANCOULTER）。　　1.2方法　　1.2.1顺铂、Genistein单药对SKOV3细胞增殖的影响收集对数生长期细胞，8×103个/孔接种于96孔培养板，37℃、50ml/LCO2孵箱培养12h，细胞贴壁后弃去培养液，加入含不同浓度药物的培养基200μl，顺铂组浓度为0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml，Genistein组浓度为2.5、5、10、20、40、

5、80μg/ml，为评估DMSO对实验的影响，设6个DMSO组（浓度与Genistein各组DMSO含量一致），同时设对照组，每组设6个复孔。继续培养72h，每孔加入MTT(5mg/ml，20μl),继续孵育4h后弃培养液，每孔加入DMSO150μl，振荡10min，酶标仪测吸光度(A490)，按以下公式计算：细胞增殖抑制率=（对照组A490值实验组A490值）/对照组A490值×100%，取6孔均值绘制浓度效应曲线。　　1.2.2顺铂联合Genistein对SKOV3细胞增殖的影响方法基本同前。顺铂选0.625、1.25、2.5、5μg/ml4个浓度;Genistein选2.5、5

6、、10、20、40μg/ml5个浓度，设对照、单药、联合共30种组合。用以下公式计算两药的相互作用:q=E(AB)/[EA+EBEA×EB]。其中E(AB)为两药合用的抑制率，EA和EB为各药单用的抑制率，q>1.15为协同作用，0.85　　1.2.3顺铂、Genistein单药及联合对周期和凋亡的影响根据MTT结果，顺铂浓度选2.5μg/ml,Genistein选5.0、10.0μg/ml，设对照、单药和联合共6组。加药48h后收集细胞，分别按DNAPrepStainKit试剂盒和ApoptosisDetectionKit试剂盒说明书进行细胞固定、染色，上流式细胞仪分析。　

7、　1.3统计方法　　采用SPSS10.0进行统计学处理。　　2结果　　2.1顺铂、Genistein单药对SKOV3细胞增殖的影响　　顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制作用随浓度的增加呈平缓的增强趋势，当浓度达10μg/ml以上时，顺铂对增殖的抑制率才急剧上升，并在20μg/ml时达到51.6%，见图1，与对照组相比差异显著(P<0.05)。而顺铂在2.5μg/ml浓度以下时，对SKOV3细胞增殖的抑制作用与对照组无显著差异(P>