甘草细胞培养物黄酮含量测定方法的建立论文

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1、甘草细胞培养物黄酮含量测定方法的建立论文王磊杨英周圆圆敖明章余龙江【摘要】目的建立一种简单快速测定甘草细胞培养物中黄酮含量的方法。方法采用超声乙醇浸提法提取黄酮类物质，根据悬浮培养的甘草细胞中黄酮成分的结构和光谱特性，利用10％氢氧化钾为显色剂，在410nm波长处测定样品中黄酮含量。结果吸光度值与黄酮含量呈良好线性关系（r=0.9994）；回收率为98.08%，RSD为1.6%（n=5）；测定结果在80min内稳定。结论该方法操作简便、耗时少，可快速测定甘草培养物中黄酮含量。【关键词】甘草悬浮培养黄酮分光光度法Abstract：Ob

2、jectiveAspectrophotometrymethodfordeterminationofflavonoidsinthesuspensioncelloflicoriceogenicagentandabsorbanceinedetryat410nm.ResultsTheresultsshog/ml(r=0.9994)andtheaveragerecoveryethodissimple,convenientandsuitablefordeterminationofflavonoidsinthesuspensioncellofli

3、corice.Keyetry药用甘草为豆科甘草属多年生草本植物，以根和茎入药。临床及药理研究证明，甘草中主要药用成分之一的黄酮类化合物.freel1，超声提取60min。取出，放冷至室温，补足损失溶液。取提取液5ml于5000r/min转速下离心5min后，取上清液2.5ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。1.3悬浮培养甘草细胞黄酮成分定性分析参照文献［7，8］进行显色反应，并按文献［5］利用亚硝酸钠－铝盐为显色剂对供试液显色并在400～500nm波长进行扫描。1.4悬浮培养甘草细胞黄酮含量测定1.4.1

4、检测波长的选择准确吸取标准品溶液、供试品溶液各1ml，分别置10ml容量瓶中。将两份溶液分别标记为1，2号，按标准曲线制备显色溶液，并在200～500nm波长间进行扫描。1.4.2标准曲线的制备准确称取60℃干燥至恒重的芦丁对照品50.0mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。准确吸取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。准确量取标准品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置于10ml试管中，再各加0.5ml10%KOH溶液，充分摇匀显色5min后，用甲醇定容至10ml，摇匀

5、，用UV-2100分光光度计测定其在410nm处的吸收值。以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。1.4.3精密度、加样回收率及稳定性实验取同一批甘草细胞培养物分别制备5份样品溶液，按标准曲线方法显色，在410nm处测定吸光度值，考察精密度；准确量取已知黄酮含量的1ml提取液5份，分别加入一定量的芦丁标准品，按标准曲线制作方法显色，测定吸光度计算黄酮含量，得出回收率；将已测样品于室温放置10，20，40，80min后，测定样品吸光度，考察稳定性。2结果2.1悬浮培养甘草细胞黄酮成分定性分析通过黄酮类化合物特有的显色反应能够定

6、性地判断其含有的成分。悬浮培养甘草细胞供试液进行的显色反应结果如表1所示。结果表明，甘草细胞培养物含有结构中不包含邻二酚羟基的黄酮、黄酮醇、二氢黄酮等黄酮类化合物。对供试液和亚硝酸钠－铝盐反应体系进行波长扫描，反应体系在500nm处没有出现相应的吸收锋，进一步说明了供试液中主要成分是不含邻二酚羟基的黄酮类化合物，结果见图3。以上实验表明，悬浮培养的甘草细胞主要成分是结构中不包含邻二酚羟基的黄酮、黄酮醇、二氢黄酮等黄酮类化合物。因此，亚硝酸钠-铝盐显色法不适用于悬浮培养甘草细胞中黄酮含量的测定。根据上述波长扫描图，反应体系存在410n

7、m左右的碱性显色体系吸收峰。表1黄酮类化合物分析结果（略）2.2悬浮培养甘草细胞黄酮含量的测定2.2.1检测波长的选择通过对标准品溶液和样品供试液在200～500nm波长范围内的扫描。表明芦丁标准品和样品溶液在410nm具有相同的吸收峰及其最大吸收值，故选择410nm为测定波长见图2。2.2.2标准曲线按方法1.4.2制得标准曲线，并计算得到标准方程A=2.63C+0.0224，r=0.9994（A为吸光度，C为标准品浓度）。实验表明标准品浓度在0～0.05g/L范围内与吸光度A成良好的线性关系见图3。2.2.3精密度、加样回收率及

8、稳定性实验精密度实验结果见表2，甘草细胞培养物中黄酮平均含量为6.415mg/g，RSD=1.362%，精密度良好。加样回收实验结果如表3所示，平均回收率为98.08%，RSD为1.55%。将已测样品室温放置10，20，40，80mi