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1、甘草总黄酮含量测定方法研究论文【摘要】目的选择适宜的对照品，建立能够准确测定甘草中总黄酮含量的方法。方法针对甘草苷、柚皮苷、芦丁3种对照品分别使用紫外分光光度法，通过全波长扫描，比较不同对照品和样品与显色前后的最大吸收波长，从而确定适合的对照品。结果甘草苷对照品和样品液经过碱处理后最大吸收波长分别为334，334.5nm且全波长扫描后得到峰形基本一致，而柚皮苷对照品经过相同处理后最大吸收波长在419.5nm，芦丁对照品和样品分别经过Al2（NO3）3-NaOH-NaNO2显色后最大吸收波长在510nm和363nm。通过对3种方法的测定结果进行统计学分析.freelinationofflavo
2、noidsinGlycyrrhiza.MethodsToparethelargestabsorptionetry.ResultsStandardLiquiritinandsamplesprocessedbyalkalihadthelargestabsorptionatthe334nmand334.5nminecontentofflavonoidsinglycyrrhizaetrybystandardLiquiritinisapracticalmethodetry甘草中的黄酮类成分包括黄酮类、二氢黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、查尔酮类和双黄酮类［1］化合物，其中以二氢黄酮类和查尔酮类含量较高［2
3、］。二氢黄酮类包括：甘草苷(liquiritin)、甘草苷元(liquiritigenin)、新甘草苷(neoliquiritin)、甘草素（liquiritigenin）等，查尔酮类包括：异甘草苷(isoliquiritin)、异甘草素（isoliquiritigenin）、异甘草苷元(isoliquiritigenin)、新异甘草苷(neoisoliquiritin)等［3～7］。而其中比例较大的成分以甘草苷为主［8］。甘草总黄酮的测定常用芦丁［9～10］、柚皮苷［11～13］为对照品通过紫外分光光度法进行测定，而《中国药典》中甘草项下没有规范总黄酮成分含量的测定方法［14］，导致甘草总
4、黄酮成分有多种不同的测定方法。本实验研究通过对不同测定方法进行考察，比较不同对照品和样品采用相应方法显色后的最大吸收波长，对3种对照品相应测定结果分析，确定最适宜甘草总黄酮含量测定的对照品和测定方法。1器材1.1仪器HITACHIU-2000Spectrophotometer。1.2样品甘草生药样品由北京中医药大学王文全教授提供和鉴定,全部为甘草GlycyrrhizauralensisFisch（样品按来源依次编号为1.杭锦旗1年生；2.杭锦旗2年生；3.杭锦旗3年生；4.杭锦旗4年生；5.杭锦旗5年生；6.新疆乌苏3年生；7.杭锦旗野生；8.杭锦旗野生横生茎；9.甘肃金塔野生；10.宁夏盐
5、池野生；11.甘肃酒泉野生；除杭锦旗野生横生茎外其余10份样品均为根）。1.3试剂供含量测定用甘草苷（编号：111610）、柚皮苷（编号：110722）：中国药品生物制品检定所；芦丁对照品由北京中医药大学马长华教授制备；氢氧化钾(ＡＲ)、甲醇(ＡＲ)、硝酸铝（AR）、亚硝酸钠（AR）、氢氧化钠（AR）。2方法2.1对照品溶液的制备精密称定甘草苷、柚皮苷、芦丁标准品适量,用甲醇溶解,分别定容于25，10，10ml容量瓶中,制得浓度为0.07504ｇ·Ｌ-1的甘草苷对照品溶液、0.968ｇ·Ｌ-1的柚皮苷对照品溶液和1.003ｇ·Ｌ-1的芦丁对照品溶液。2.2样品的提取取甘草粉末适量,精密称定,
6、加甲醇50ml,称重,（250in,称重,补足损失重量,.freell,加入1ml甲醇,其中一份加入10%ＫＯＨ溶液0.5ml显色,室温放置5min,用甲醇稀释至10ml，以相应溶剂为空白，在λ334nm处测定吸收度。2.3.2柚皮苷为对照品的测定方法供试液制备同“2.3.1”项，在波长419nm处测定吸收度。2.3.3芦丁为对照品的测定方法精确吸取提取液0.5ml，加3ml蒸馏水，5%亚硝酸钠溶液0.5ml放置6min，加10%硝酸铝溶液0.5ml，混匀后放置6min，加5%氢氧化钠2.5ml混匀，放置15min后蒸馏水定容至10ml。以相应溶剂为空白，在波长510nm处测定吸收度。2.4
7、方法学考察2.4.1以甘草苷为对照品方法学考察甘草苷方法标准曲线的测定：精确吸取甘草苷对照品溶液0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5ml置6个10ml容量瓶中,按“2.3.1”项下操作。以吸收度A为纵坐标,对照品的浓度C(mg/ml)为横坐标,得线性回归方程:y=66.753x-0.0178,ｒ=0.9999,线性范围为18.76～112.56μｇ。显色30min内稳定。甘草苷方法重复性实验：取6
