依达拉奉改善大鼠血脑屏障损伤的aqp4机制研究论文

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1、依达拉奉改善大鼠血脑屏障损伤的AQP4机制研究论文【摘要】目的研究大鼠脑出血后血脑屏障(BBB)通透性与水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)的关系及依达拉奉的干预作用。方法采用自体动脉血注入尾状核法制成大鼠脑出血模型，免疫组化法观察AQP4的表达，伊文思蓝法测BBB的通透性，干湿重法计算脑含水量表示脑水肿。结果与对照组相比，模型组及依达拉奉组BBB通透性均在出血后6h开始升高，1～3d最高，依达拉奉组明显小于模型组(P0.01)。2组AQP4也于6h开始升高，1～3d达到高峰依达拉奉组明显小于模型组(P0.05)。BBB通透性与AQP4

2、表达呈显著正相关(r=0.880,P0.01),与脑水肿变化趋势一致。结论脑出血后产生的AQP4增多,从而增加BBB通透性,参与脑水肿形成和发展.freeleabilityandaquaporin4(AQP4)andtheeffectofedavaroneafterexperimentalintracerebralhemorrhage(ICH)inrats.MethodsTheICHmodelmunohistochemicalmethod,BBBpermeabilitybyEBmethodandbrainethod.ResultsIncontrastt

3、othecontrolledgroup,BBBpermeabilityincreasedat6hoursinICHgroupandedavaronegroupafterICH,reachedpeakat1～3days,andeability(r=0.880,P0.01).ConclusionAfterICHAQP4expressionupregulateandBBBpermeabilityincrease,orrhage;Cerebraledema;AQP4;Bloodbrainspinalfluidbarrier;Edavarone脑出血(intra

4、cerebralhemorrhage,.freelg/kg腹腔麻醉。参考Hua等1方法固定大鼠。头正中切约lcm的纵切口，暴露前囟，使微量注射仪套管尖端移至前囟前0.5mm，左侧中线旁3mm，用大针头钻孔,穿透颅骨。用40℃水温浴鼠尾约10min取出擦干，在距鼠尾末端约5mm处剪断，用微量注射仪吸新鲜血液约50μl，迅速插入钻好的孔内，向内进针6mm。在2.5min内注入，留针5min后缓慢退针。拔针后无血液自针道返流，苏醒后出现神经功能缺损症状视为造模成功。(2)对照组：前期操作同模型组，但不注血液。(3)依达拉奉组：建模前每隔12h腹腔注射依达拉奉2mg

5、/kg直到相应的时相点,对照组及模型组用等量的生理盐水腹腔注射。1.3检测方法1.3.1干鲜质量的测定:取血肿中心前半分区脑组织,准确称重置于100～110℃的烤箱中烘烤24h至恒重后,称取干质量，根据公式：脑组织含水量(%)=(鲜质量-干质量)/鲜质量来计算,精确度为0.1。1.3.2血脑屏障通透性测定：采用伊文思蓝甲酰胺法，大鼠处死前1h经尾静脉注入2%EB(2ml/kg),称取血肿内侧部分置于甲酰胺(1ml/100g脑组织)中60℃孵育24h。1000r/min,离心5min,分光光度计(λ=632nm)测定上清液OD值,根据标准曲线计算出EB含量。1

6、.3.3AQP4免疫组化检测：常规脱水,加一抗AQP4(1∶50),加生物素标记山羊抗兔IgG,脱片,显微镜下观察。棕黄色为强阳性,黄色为阳性,浅黄色为弱阳性,与间质颜色一致者为阴性。随机采集5个高倍视野(10×40)，采用双盲法计算每个高倍镜视野AQP4阳性细胞表达率。1.4统计学分析实验数据计量资料均以±s表示，应用SPSS13.0统计软件包对数据进行处理。多组间比较采用单因素方差分析检验，变量之间做两两的直线相关分析，P0.05差异有统计学意义。2结果见表1、2、3、4。表1脑出血后不同时间点脑含水量注：与假手术组比较，*P0.05;与ICH组同

7、一时间点比较，#P0.05表2脑出血后不同时间点脑组织EB含量表3脑出血后不同时间点脑组织AQP4表达含量表4EB含量与AQP4表达的相关分析注：相关性检验，*P0.01;表格数值为相关系数r值3讨论AQP4是近年来研究比较多的一类水特异性膜内在蛋白，为水分子跨膜转运提供了一个全新的分子结构基础，对于维持机体的水平衡起着重要作用，并且与水平衡紊乱所造成的一些疾病有密切关系2。AQP4广泛存在于中枢神经系统的星形胶质细胞膜、蛛网膜下腔、血管周围的胶质细胞、室管膜细胞、脉络丛及下丘脑渗透压感受区器官，并认为其在中枢神经系统作为渗透压感受器有介导和调节水的

8、运输和平衡的作用。在生理条件，水通道基本上是处于激活