杜仲叶中绿原酸的提取纯化研究

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1、杜仲叶中绿原酸的提取纯化研究袁华，邓良，杨小俊，闫志国，吴元欣【关键词】绿原酸；,,提取；,,纯化；,,杜仲叶　　摘要：目的研究杜仲叶中绿原酸的提取纯化方法。方法采用水提、絮凝脱色、树脂吸附、重结晶工艺提取纯化。结果杜仲叶的水浸提液浓缩后用1%壳聚糖絮凝去杂、活性碳脱色得到进样液，进样液用NKA-9树脂吸附，50%乙醇解吸，洗脱液浓缩后的粗品经甲醇重结晶得到纯度≥97%的绿原酸，提取率≥65%。结论优化完善了杜仲叶中绿原酸的提取纯化方法，为杜仲资源的充分综合利用和产业化开发提供了参考。　　关键词：绿原酸；提取；纯化

2、；杜仲叶　　StudyontheExtractionandPurificationofChlorogenicAcidinEumiaulmoidesOliv.Leaves　　Abstract：ObjectiveTostudytheoptimumextractionandpurificationprocessforchlorogenicacidinEumiaulmoidesOliv.Leaves.MethodsTheprocessethanolrecrystallization.ResultsTheextracting

3、ratioofchlorogenicacidumandimprovedtechnologyfortheextractionandpurificationofchlorogenicacidinEumiaulmoidesOliv.LeavesiaulmoidesOliv.　　杜仲EumiaulmoidesOliv.是我国特有的经济树种，其药用价值历来受到人们关注。杜仲中主要有效成分绿原酸具有抗菌、抗病毒、利胆、保肝、降压、清除自由基等作用。2000多年前我国的《神农本草经》就将之列为中药上品。近年来研究表明杜仲叶中的主

4、要化学成分和杜仲皮基本一致，且杜仲叶中绿原酸含量更为丰富，达到干叶重的1%~5%，因此从原材料丰富且价廉的杜仲叶中提取绿原酸成为研究热点〔1～3〕。其中钱骅〔4〕、刘军海等〔5〕提出的大孔吸附树脂提取纯化法展示了一定的工业化前景，但报道的树脂分离效果不一致，且均未见有关终产品纯度及收率的报道。杜仲叶提取物中除含绿原酸外，还含有鞣质、蛋白质、多糖等物质。为了得到纯度较高的绿原酸，必须对提取液进行多步分离纯化。本文在文献工作的基础上，围绕产业化目标，改进完善了提取制备工艺，采用水提、絮凝脱色、树脂吸附、重结晶工艺提取制

5、备了纯度与收率较高的绿原酸。　　1材料与方法　　1.1材料与仪器杜仲叶采自湖北五峰（风干、粉碎）；主要试剂乙醇、甲醇、稀盐酸等均为分析纯；壳聚糖为生化试剂；NKA9，AB8，NKAⅡ型树脂(南开大学化工厂)；绿原酸（中国药品生物制品检定所）。ZFⅠ型紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；Agilent1100型高效液相色谱仪。　　1.2提取纯化工艺准确称取10.0g杜仲叶，用去离子水2×120ml在80℃下动态提取150min，过滤,提取液减压浓缩至100ml，浓缩液中加入1%壳聚糖溶液4ml絮凝，过滤，滤液用活性碳脱

6、色，得进样清液，用NKA9树脂吸附进样清液，用50%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得绿原酸粗品，经甲醇重结晶得绿原酸纯品。提取率≥65%（以杜仲叶中绿原酸含量计），纯度≥97%。　　1.3绿原酸的含量检测绿原酸的含量测定参照文献〔6，7〕进行。　　2结果　　2.1提取条件　　2.1.1提取溶剂的选择杜仲叶中绿原酸的提取一般选用40%乙醇水溶液，使用乙醇水溶液提取除增加溶剂成本以外，提取液中的脂溶性成分增加，造成后续处理困难，绿原酸在热水中溶解度较大，本文选用水为提取溶剂。　　2.1.2提取温度的选择随着提取温度的升

7、高，绿原酸得率不断增加，当温度高于80℃时，绿原酸得率开始下降。随着温度的升高，杜仲叶中其它成分的溶出也不断增加，同时考虑到绿原酸的热不稳定性，提取温度控制在80℃以下。　　2.1.3提取时间的影响随着时间的延长，绿原酸得率逐渐升高，尤其是在50～150min内，二者几乎呈现良好的线性关系，随后逐渐达到提取平衡状态。　　2.1.4浸提液pH值的影响在温度、料液比、提取时间一致的条件下，用稀盐酸调节提取溶剂的pH值，当pH值为4时，绿原酸得率较高。因此，绿原酸的最佳提取工艺条件为：每10.0g杜仲叶，用2×120ml

8、去离子水在pH=4及温度80℃下动态提取150min。　　2.2絮凝脱色传统中药提取工艺中常常采用水提醇沉法，目的是除去提取液中的淀粉、树胶、蛋白质、粘液质、果胶、多糖、无机盐等无效成分。实验发现，水提醇沉法中醇的浓度越高越有利于除去杂质，但有效成分由于醇沉包夹损失也随之增大。另外水提醇沉工艺还存在乙醇消耗量大、生产成本高、生产安全系数低等缺点，因此需要改进