杜仲叶中绿原酸、黄酮的提取、分离纯化及结构鉴定

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1、1943688学校代码：研究生学号：10264M070208212上海海洋大学硕士学位论文题英文题目：杜仲叶中绿原酸、黄酮的提取、分离纯化及结构鉴定ResearchonChlorogenicacidandFlavonoidsfromEucommiaulmoidesleaves：Extraction，Isolation，PurificationandStructuralIdentification专业：食品科学与工程研究方向：天然活性物质研究姓名：张玲指导教师：杨性民刘青梅教授二oo九年十二月十六日一㈣上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我

2、恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：w和今日期：劢『口年弓月牛日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有

3、关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。，保密留，刭1年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密口学位论文作者签名：硝拎指导教师签名：矽旷钮～R期：乏纠口年3月牛日日期：0叫萨F弓月午日答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注中国水产科学研究杨宪时研究员主席院东海水产研究所周培根上海海洋大学教授委员吴文惠上海海洋大学教授委员汪之和上海海洋大学教授委员陶妍上海海洋大学教授委员曲映红上海海洋大学讲师秘书答辩地点2教305室答辩日期2010／1／19上海海洋大学硕上学位论文杜仲叶中绿原酸、黄酮的提取、分离纯化及结构鉴定摘

4、要杜仲(EucommiaulmoidesOliv．)是具有保健功效的药用植物，近年来研究发现，杜仲叶主要成分与杜仲皮相近，且具有等同药理功效，为了进一步分析杜仲叶中具体的功效因子。本文以杜仲叶为研究对象，通过对杜仲叶有效成分不同方法的提取、分离、纯化研究；通过薄层色谱和紫外光谱分析，并经电喷雾源一质谱和核磁共振检测对纯化组分进行结构分析，旨在进一步确定最佳提取分离方法，发现杜仲叶有效成分的分子结构，为杜仲叶的开发利用奠定基础。主要研究结果如下：1．杜仲叶有效成分的提取分别采用回流法、超声波法、微波法对杜仲叶中有效成分进行提取。考察料液比、提取时间

5、、乙醇浓度、溶剂pH值、提取次数等因素对有效成分提取率的影响，经正交试验优化，最终比较得出采用超声波辅助回流提取法较好。最佳提取工艺为：料液比为1：10，提物温度80。C，乙醇浓度30％，提取溶剂pH值为5，先超声波提取30min，然后回流法提取30min，重复此操作1次。根据最优工艺组合，称取5kg杜仲叶进行扩大试验，最终杜仲叶提取物的出粉率为24％，其中含绿原酸22．29％，含总黄酮54．67％。2．杜仲叶粗提物的分离纯化首先从九种大孔树脂中筛选出最佳的吸附树脂为NKA．II，对绿原酸的静态吸附量为17．17mg／g，吸附率为90．92％，解

6、吸率为75．63％，对总黄酮的静态吸附量为49．16mg儋，吸附率为90．44％，解吸率为70．02％；然后通过静态吸附．解吸试验表明，NKA．II树脂属于快速平衡型树脂，静态吸附4h后达到吸附饱和，最佳的吸附液pH值为4，用70％乙醇为解吸液可将绿原酸、黄酮类化合物有效的洗脱下来；接着通过动态吸附．洗脱试验结果显示，上样液浓度为绿原酸0．9012mg／mL，总黄酮3．4406mg／mL；上样液流速为1．0mL／min，上样液体积不宜超过10倍的柱体积。根据小试验的优化参数，进行扩大试验。称取6009杜仲叶粗提物，经NKA．II大孔树脂分离，依次

7、采用纯净水(18L)、30％乙醇(9L)、50％乙醇(15L)、70％乙醇(12L)、90％乙醇(3L)进行梯度洗脱，得到三个组分依次为FA(64．939)、FB(36．069)和Fc(30．279)。其中FA含有大量的绿原酸类物质，FB中既含有绿原酸类物质又含有黄酮类物质，Fc主要含黄酮类化合物，故选用FA和Fc进行纯化。称取259的组分FA，采用乙醇一水(0％、10％、20％、30％、40％)梯度洗脱，经聚酰胺柱分离得到三个组分FA-1、FA-2和FA．3，收集第21"--'70管洗脱液浓缩后，再经SephadexLH．20树脂纯化得到组分F

8、A一2。称取259的组分Fc，采用乙醇-水(O％、30％、40％、50％、60％、70％、90％)梯度洗脱，经聚酰胺柱分离得到五个组分F