半枝莲含药血清对肝癌h22细胞凋亡及线粒体膜电位的影响论文

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1、半枝莲含药血清对肝癌H22细胞凋亡及线粒体膜电位的影响论文代志军,王西京,薛茜,纪宗正,刘小旭,康华峰,管海涛,马小斌,任宏涛【摘要】目的：探讨中药半枝莲提取物（ScutellariaBarbataextract,ESB）含药血清对肝癌H22细胞凋亡率及线粒体膜电位的影响。方法：体外培养小鼠H22肝癌细胞，以ESB高、中、低剂量含药血清培养液作用于H22细胞，并设立空白血清及5氟尿嘧啶（fluorouracil，5Fu）组（阳性对照组）。应用四甲基偶氮唑盐法检测药物对细胞增殖的抑制作用；透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化；碘

2、化丙啶标记，流式细胞术检测肿瘤细胞周期及细胞凋亡情况；采用荧光探针罗丹明123负载，激光扫描共聚焦显微镜下观察H22细胞的荧光强度，分析H22细胞线粒体膜电位的大小。结果：ESB含药血清有一定的抑制H22细胞增殖的作用，高、中剂量组96h抑制率分别为（47.5±6.4）%和（36.3±4.5）%。透射电镜下可见部分细胞呈典型凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示.freelcontainingScutellariaBarbataextract(ESB)onapoptosisrateandmitochondrialtransmemb

3、ranepotential(MTP)oflivercancercelllineH22frommiceinvitro.Methods:H22cellsediumdoseESBgroup,.freelassayinetheproliferationratesofH22cells.Cellularmorphologyissionelectronmicroscope(EM).Therhodamine123icroscope.ThefluorescenceintensityofH22cellsindicatedtheMTPofH22cel

4、ls.Results:TheinhibitionofserumcontainingESBontheproliferationofH22cellsinvitroedependentmanner.Thetypicalmorphologicalchangesofapoptosisinhighdosefor48h.Theapoptosisratesofblankcontrolgroup,5Fugroup,loediumdoseESBgroupandhighdoseESBgroupmiceasparedediumandhighd

5、oseESBgroupseffectivelyinducesapoptosis,ayberelatedtothedecreaseofMTPinH22cells.Keyitochondrialtransmembranepotential;drugcontainingserum;invitro半枝莲为唇形科黄芩属植物（ScutellariabarbataD.Don）的干燥全草，性辛、苦、寒，具有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛等功效。文献报道，半枝莲可抑制多种肿瘤细胞生长［13］，而且可以诱导细胞凋亡，但其具体作用机制尚不清楚。近年来

6、大量研究发现，线粒体与细胞凋亡进程密切相关，在药物诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导过程中，线粒体在促进凋亡信号和caspase激活之间起着不可替代的作用［4］。本实验通过观察半枝莲提取物（Scutellariabarbataextract,ESB）诱导H22小鼠肝癌细胞凋亡过程中线粒体膜电位(mitochondrialtransmembranepotential,MTP)变化，探讨其可能的作用机制。1材料和方法1.1动物和瘤株清洁级雄性SD大鼠，体质量220～250g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供(陕医动字第08005号）。小

7、鼠肝癌H22细胞株由陕西师范大学生命科学学院保存。1.2药品和试剂新生牛血清和RPMI1640培养基(Gibco,USA）；碘化丙啶（propidiumiodide,PI）、四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyltetrazolium,MTT）和荧光探针罗丹明123（Sigma,USA）；ESB（为10︰1的水提物），批号为07078（西安中鑫生物科技有限公司）；5氟尿嘧啶（5fluorouracilinjection,5Fu）注射液，250mg/支，批号为070201（上海旭东海普药业有限公司）；其他试剂均为国产分

8、析纯。流式细胞仪（BeconDickinsonFacsalibur公司,USA），激光扫描共聚焦显微镜（Olympus,FluoViel蒸馏水中制成混悬液），2次/d，共3d；空白对照组给予灌服生理盐水。灌药前禁食4h，自由取水。于末次灌胃后2h心